Комплет за откривање антитела за неутрализирање SARS-CoV-2 (ELISA)
【НАМЕНЕТА УПОТРЕБА】
Комплет за детекција на неутрализирачки антитела САРС-КоВ-2 е конкурентна ензимско-поврзана имуносорбентна анализа (ELISA) наменета за квалитативно и полуквантитативно откривање на вкупно неутрализирачки антитела на САРС-КоВ-2 во човечкиот серум и плазма. Комплетот за откривање антитела за неутрализирање на SARS-CoV-2 може да се користи како помош при идентификување на лица со адаптивен имунолошки одговор на SARS-CoV-2, што укажува на неодамнешна или претходна инфекција. Комплетот за откривање антитела за неутрализирање SARS-CoV-2 не треба да се користи за дијагностицирање на акутна инфекција SARS-CoV-2.
【ВОВЕД】
Коронавирусните инфекции обично предизвикуваат неутрализирачки реакции на антитела. Стапките на сероконверзија кај пациенти со КОВИД-19 се 50% и 100% на 7-ми и 14-ти ден по почетокот на симптомите, соодветно. За да се презентира сознанието, соодветното антитело за неутрализирање на вирусот во крвта е препознаено како цел за одредување на ефикасноста на антителата, а повисоката концентрација на неутрализирачкото антитело укажува на поголема заштитна ефикасност. Тестот за неутрализација за намалување на плаката (PRNT) е препознаен како златен стандард за откривање на неутрализирачки антитела. Сепак, поради неговата мала пропусност и повисоките барања за работа, PRNT не е практичен за серодијагноза и евалуација на вакцини од големи размери. Комплетот за детекција на неутрализирачки антитела САРС-КоВ-2 се заснова на методологијата за имуносорбентна анализа поврзана со конкурентни ензими (ELISA), која може да открие неутрализирачко антитело во примерокот на крв, како и специјално да пристапи до нивоата на концентрација на овој тип антитела.
【Процедура за тестирање】
1. Во посебни епрувети, издвојте 120 μL од подготвениот раствор на hACE2-HRP.
2. Додадете 6 μL калибратори, непознати примероци, контроли за квалитет во секоја епрувета и добро измешајте.
3. Префрлете 100 μL од секоја смеса подготвена во чекор 2 во соодветните бунари за микроплоча според претходно дизајнираната конфигурација за тестирање.
3. Покријте ја плочата со запечатувач на плочи и инкубирајте на 37°C 60 минути.
4. Отстранете го запечатувачот на чиниите и измијте ја плочата со приближно 300 μL 1× раствор за миење по бунар четири пати.
5. Допрете ја плочата на хартиена крпа за да ја отстраните преостанатата течност во бунарите по чекорите за миење.
6. Додадете 100 μL раствор на TMB во секоја бунар и инкубирајте ја плочата на темно на 20 – 25°C 20 минути.
7. Додадете 50 μL раствор за стопирање во секоја буна за да ја запрете реакцијата.
8. Прочитајте ја апсорпцијата во читачот на микроплочи на 450 nm во рок од 10 минути (630 nm како додаток се препорачува за перформанси со поголема прецизност.
