Ko te SARS-Cov-2 e aukati ana i te Kino Tohu AntiBody (ESISA)
【Kaupapa】
Ko te SARS-Cov-2 e aukati ana i te kete tohu antibody i runga i te whakataetae ESISA.
Ma te whakamahi i nga Kaipupuri Whakakorea Raina (RBD), pūmua mai i te pūmua punga (s) pūmua me te pūtau manaaki
Ko Receptor Ace2, kua hangaia tenei whakamatautau hei whakatau i te taunekeneke a te Veus-manaaki.
Ko nga Calibrators, nga mana kounga, me nga serum, nga tauira plasma ranei ka tino uru ki te waimehatanga
Ko te Buffer kei roto i te hace2-hrp conjugate i te ngongo iti. Katahi ka whakawhitia nga ranunga ki roto
Ko nga punawaiki huakita kei roto i te kohinga SSEM-COV-2 RBD Taputapu (RBD) mo
kōkiri. I roto i te 30-Minupiti meneti, ko te Antibody motuhake a RBD i roto i nga Caltibrators, QC me
Ka whakataetae nga tauira me te Hace2-HRP mo te taapiri i te riihi i te RBD i nga puna. I muri
Ko te whakaurunga, ka horoia nga puna e 4 nga wa ki te tango i te Hace2-HRP Conjugate. Tuhinga o mua
Ka tapirihia te TMB me te aukati mo te 20 meneti i te pāmahana o te rūma, i puta mai te whanaketanga o te
Tae kikorangi. Ka mutu te whakawhanaketanga tae me te taapiri o te 1n HCl, me te whakauru
te inenga i whanganga i te 450 nm. Ko te kaha o te tae i hangaia ki te
Tuhinga o mua, a, he mea whai kiko ki te nui o nga paerewa e rite ana ki te kaupapa ano.
Na roto i te whakataurite me te pihi o te koriri i hangaia e nga calibrators i whakaratohia, te kukume o
Ko te aukati i nga antibodies i roto i te tauira kaore e mohiotia ana ka kiia.
【Nga taonga e hiahiatia ana engari kaore i whakaratohia】
1. Ko te wai, he wai ranei
2.
3.. Tohutohu Pipette Whakakore
4. Panui Microplate E kaha ana ki te panui panui i te 450nm.
5. Pepa Pepa
6. pepa pepa
7. Ko te whakaranu a Vortex, he rite ranei
【Kohinga tauira me te rokiroki】
1..
2. Me matua herea nga tauira ka penapena kia tae atu ki te 48 haora i te 2 ° C - 8 ° C i mua i te awhina.
Ko nga tauira i puritia mo te wa roa (tae atu ki te 6 marama) me tio noa iho i te waa -20 ° C i mua i te whakapae.
Aukuhia nga huringa koreutu-thw.
Kawa
【Te faaineineraa reagent】
1
(20 ° ki te 25 ° C). Whakaorangia nga reagents katoa i roto i te pouaka whakamātao i muri i te whakamahi.
2. Ko nga tauira katoa me nga mana whakahaere me vortexed i mua i te whakamahi.
3.. Te faaineineraa a Hace2-HRP: Whakakorehia te Hace2-HRP te aro ki te 1: 51 Te Raru Raupatu me te waimehatanga
Karaka. Hei tauira, ko waimeha 100 μl o Hace2-HRP te aro ki te 5.0mL o te HRP Dilution Buffer ki
Hanga he otinga hace2-HRP.
4
Tuhinga o mua o te 1:19. Hei tauira, ko te waimeha 20 ml o te 20 × horoi horoi me te 380 ml o te deoiolized ranei
Te wai totoro hei hanga 400 ml o te otinga 1 × horoi.
【Nga tikanga whakamatautau】
1. I roto i nga ngongo wehe, nga Aliquot 120μl o te otinga Hace2-HRP kua rite.
2. Tāpirihia 6 μL o Callibrators, tauira kore mohiotia, nga mana kounga i ia ngongo ka uru pai.
3. Whakawhiti 100μl o ia whakaranu kua rite i te taahiraa 2 ki te puna microplat e tika ana kia rite
ki te whirihora whakamātautau whakamātautau.
3. Hipokina te pereti me te hiri pereti me te whakauru i te 37 ° C mo te 30 meneti.
4. Tangohia te kaihoroi pereti ka horoi i te pereti me te 300 μl o te otinga 1 ×
5. Tap te pereti i runga i te tauera pepa hei tango i te wai toenga i nga puna i muri i nga hikoinga horoi.
6. Tāpirihia te 100 μl o te otinga TMB ki ia pai me te whakakii i te pereti i te pouri i te 20 - 25 ° C mo te 20 meneti.
7. Tāpirihia te 50 μl o te otinga aukati ki ia pai ki te aukati i te tauhohenga.
8. Panuihia te whakauru i roto i te kaipānui miihini i te 450 nm i roto i nga meneti 10 (630nm hei whakauru
tūtohutia kia nui ake te mahi o te mahi).