SARS-CoV-2 Kete Tirohanga Antibody Detection (ELISA)
【MĀTĀPONO】
Ko te SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit kei runga i nga tikanga whakataetae ELISA.
Ma te whakamahi i te rohe herenga kaiawhina (RBD), te pūmua mai i te pūmua o te koikoi (S) me te pūtau kaihautū
te kaikawe ACE2, i hangaia tenei whakamatautau ki te whakatauira i te tauwhitiwhitinga whakangao a te kaihautu huaketo.
Ko nga Calibrators, Ko nga Mana Kounga, me nga tauira serum, plasma ranei he pai te whakakotahi ki te waimeha
te parepare kei roto te hACE2-HRP conjugate kua wehea ki roto i nga ngongo iti.Na ka whakawhitia nga ranunga ki roto
ko nga puna moroiti kei roto i te wahanga recombinant SARS-CoV-2 RBD (RBD) mo
whakakoroki.I roto i te 30-meneti incubation, te RBD motuhake antibody i roto i te calibrators, QC me
ka whakataetae nga tauira ki te hACE2-HRP mo te herenga motuhake i te RBD e kore e nekehia i roto i nga puna.I muri
te heki, ka horoia nga puna kia 4 nga wa hei tango i te hACE2-HRP conjugate.He otinga o
Ka taapirihia te TMB ka whakakororia mo te 20 meneti i te pāmahana rūma, ka puta mai he a
tae kahurangi.Ka mutu te whanaketanga o te tae me te taapiri o te 1N HCl, a ko te whakaurunga
ka inehia ma te spectrophotometric i te 450 nm.Ko te kaha o te tae i hanga he rite ki te
te nui o te whākōkī e noho ana, ā, e pā ana ki te nui o ngā paerewa i whakamātauhia i taua huarahi.
Na roto i te whakatairite ki te ānau whakatikatika i hangaia e nga calibrators kua whakaratohia, te kukū o
Ko te whakakore i nga paturopi i roto i te tauira kaore e mohiotia ka tatauhia.
【NGĀ KAUPAPA KAUPAPA ENGARI KAORE I TE WHAKAMAHI】
1. Te wai kua whakamarohia, kua whakakorehia ranei
2. Nga paipa paipa: 10μL, 100μL, 200μL me te 1 mL
3. Nga tohutohu pipette tuku
4. Ka taea e te kaipanui Microplate te panui te urunga ki te 450nm.
5. Pepa whakangao
6. Pepa kauwhata
7. Whakaranu Vortex he rite ranei
【TE KOHI TANGATA ME TE WHAKAPUTANGA】
1. Ka taea te whakamahi i nga tauira Serum me te Plasma i kohia i roto i nga ngongo kei roto K2-EDTA mo tenei kete.
2. Me kati nga tauira ka taea te rongoa mo te 48 haora ki te 2 °C - 8 °C i mua i te whakamatautau.
Ko nga tauira e mau ana mo te wa roa (tae atu ki te 6 marama) me whakatio kotahi anake ki te -20 °C i mua i te whakamatautau.
A ape i nga huringa whakatio-rewa.
KAAWAKA
【Te Whakarite Reagent】
1. Me tango nga reagents katoa i roto i te pouaka whakamātao ka tukuna kia hoki ki te pāmahana rūma i mua i te whakamahi
(20° ki te 25°C).Whakaorangia nga reagents katoa ki roto i te pouaka whakamātao i muri tonu i te whakamahinga.
2. Ko nga tauira me nga mana whakahaere katoa me vortex i mua i te whakamahi.
3. hACE2-HRP Te Whakaritenga Rongoa: Dilute hACE2-HRP concentrate at 1: 51 dilution ratio with Dilution
Kaipupuri.Hei tauira, waimeha te 100 μL o te hACE2-HRP concentrate ki te 5.0mL o te HRP Dilution Buffer ki
hanga he otinga hACE2-HRP.
4. 1× Horoi Otinga Whakaritenga: Waimeha i te 20× Horoi Otinga ki te wai deionized, wai maturu ranei me te
ōwehenga rōrahi o 1:19.Hei tauira, waimeha 20 mL o te 20× Horoi Rongoa ki te 380 mL o te katoona,
wai māturu hei hanga 400 mL o 1× Horoi Rongoa.
【Te Tikanga Whakamatau】
1. I roto i ngongo motuhake, aliquot 120μL o te HACE2-HRP Solution kua oti.
2. Tāpirihia te 6 μL o te calibrators, nga tauira e kore e mohiotia, nga whakahaere kounga ki ia ngongo me te uru pai.
3. Whakawhitihia te 100μL o ia ranunga kua rite i te taahiraa 2 ki roto i nga puna microplate e rite ana
ki te whirihoranga whakamatautau kua whakaritea.
3. Hipokina te pereti ki te Plate Sealer ka whakamakuku i te 37°C mo te 30 meneti.
4. Tangohia te Kaihiri Pereti ka horoi i te pereti ki te 300 μL o te 1× Horoi Rongoa mo ia puna mo nga wa e wha.
5. Patohia te pereti ki te tauera pepa hei tango i te toenga wai i roto i nga puna i muri i te horoinga.
6. Taapirihia te 100 μL o te TMB Solution ki ia puna, ka whakapouri i te pereti ki te pouri i te 20 - 25°C mo te 20 meneti.
7. Taapirihia he 50 μL o te Whakamutu Whakamutua ki ia puna kia mutu te tauhohenga.
8. Panuitia te whakaurunga i roto i te panui miihiniiti i te 450 nm i roto i te 10 meneti (630nm i te mea ko
e taunaki ana mo te mahi tino tika).
