SARS-CoV-2 neitralizējošu antivielu noteikšanas komplekts (ELISA)
【IZMANTOŠANA】
SARS-CoV-2 neitralizējošu antivielu noteikšanas komplekts ir konkurētspējīgs ar enzīmu saistīts imūnsorbcijas tests (ELISA), kas paredzēts kopējo neitralizējošu SARS-CoV-2 antivielu kvalitatīvai un daļēji kvantitatīvai noteikšanai cilvēka serumā un plazmā. SARS-CoV-2 neitralizējošu antivielu noteikšanas komplektu var izmantot kā palīglīdzekli, lai identificētu personas ar adaptīvu imūnreakciju pret SARS-CoV-2, kas norāda uz nesenu vai iepriekšēju infekciju. SARS-CoV-2 neitralizējošu antivielu noteikšanas komplektu nedrīkst izmantot, lai diagnosticētu akūtu SARS-CoV-2 infekciju.
【IEVADS】
Koronavīrusa infekcijas parasti izraisa neitralizējošu antivielu reakciju. Serokonversijas rādītāji COVID-19 pacientiem ir attiecīgi 50% un 100% 7. un 14. dienā pēc simptomu parādīšanās. Atbilstoši zināšanām atbilstošās vīrusu neitralizējošās antivielas asinīs ir atzītas par mērķi antivielu efektivitātes noteikšanai, un augstāka neitralizējošās antivielas koncentrācija norāda uz augstāku aizsardzības efektivitāti. Plāksnīšu samazināšanas neitralizācijas tests (PRNT) ir atzīts par zelta standartu neitralizējošu antivielu noteikšanai. Tomēr, ņemot vērā tās zemo caurlaidspēju un augstākas prasības darbībai, PRNT nav praktiska liela mēroga serodiagnostikai un vakcīnu novērtēšanai. SARS-CoV-2 neitralizējošu antivielu noteikšanas komplekts ir balstīts uz konkurējošā ar enzīmu saistītā imūnsorbcijas testa (ELISA) metodoloģiju, kas var noteikt neitralizējošās antivielas asins paraugā, kā arī īpaši piekļūt šāda veida antivielu koncentrācijas līmeņiem.
【Pārbaudes procedūra】
1. Atsevišķās mēģenēs izdaliet 120 μL sagatavotā hACE2-HRP šķīduma.
2.Katrā mēģenē pievienojiet 6 μL kalibratoru, nezināmus paraugus, kvalitātes kontroles un labi samaisiet.
3. Ievietojiet 100 μL katra maisījuma, kas sagatavots 2. solī, atbilstošās mikroplates iedobēs saskaņā ar iepriekš izstrādātu testa konfigurāciju.
3.Plāksni pārklāj ar Plate Sealer un inkubē 37°C 60 minūtes.
4. Noņemiet plāksnīšu blīvētāju un mazgājiet plāksni ar aptuveni 300 μL 1 × mazgāšanas šķīduma katrā iedobē četras reizes.
5. Uzsitiet plāksni uz papīra dvieļa, lai pēc mazgāšanas iedobēs noņemtu atlikušo šķidrumu.
6.Katrā iedobē pievienojiet 100 μL TMB šķīduma un 20 minūtes inkubējiet plāksni tumsā 20–25°C temperatūrā.
7.Katrā iedobē pievienojiet 50 μL apturēšanas šķīduma, lai apturētu reakciju.
8. Nolasiet absorbciju mikroplašu lasītājā pie 450 nm 10 minūšu laikā (630 nm ir ieteicams kā piederums, lai nodrošinātu lielāku precizitāti).
