SARS-CoV-2 neutralizuojančių antikūnų aptikimo rinkinys (ELISA)
【NAUDOJIMAS】
SARS-CoV-2 neutralizuojančių antikūnų aptikimo rinkinys yra konkurencingas su fermentais susietas imunosorbentinis tyrimas (ELISA), skirtas kokybiniam ir pusiau kiekybiniam visų SARS-CoV-2 neutralizuojančių antikūnų žmogaus serume ir plazmoje aptikimui. SARS-CoV-2 neutralizuojančių antikūnų aptikimo rinkinys gali būti naudojamas kaip pagalbinė priemonė identifikuojant asmenis, kurių imuninis atsakas į SARS-CoV-2 yra adaptyvus, nurodant neseniai ar buvusią infekciją. SARS-CoV-2 neutralizuojančių antikūnų aptikimo rinkinys neturėtų būti naudojamas ūmiai SARS-CoV-2 infekcijai diagnozuoti.
【ĮVADAS】
Koronavirusinės infekcijos paprastai sukelia neutralizuojančių antikūnų atsaką. Serokonversijos rodikliai COVID-19 sergantiems pacientams yra atitinkamai 50 % ir 100 % 7 ir 14 dieną po simptomų atsiradimo. Remiantis žiniomis, atitinkamas virusą neutralizuojantis antikūnas kraujyje yra pripažintas taikiniu nustatant antikūnų veiksmingumą, o didesnė neutralizuojančių antikūnų koncentracija rodo didesnį apsaugos efektyvumą. Apnašų mažinimo neutralizavimo testas (PRNT) buvo pripažintas auksiniu standartu nustatant neutralizuojančius antikūnus. Tačiau dėl mažo pralaidumo ir didesnio veikimo poreikio PRNT nėra praktiškas didelio masto serodiagnostikai ir vakcinų vertinimui. SARS-CoV-2 neutralizuojančių antikūnų aptikimo rinkinys yra pagrįstas konkurenciniu fermentu susieto imunosorbento tyrimo (ELISA) metodika, kuri gali aptikti neutralizuojantį antikūną kraujo mėginyje ir specialiai pasiekti šio tipo antikūnų koncentracijos lygius.
【Bandymo procedūra】
1. Atskiruose mėgintuvėliuose paskirstykite 120 μL paruošto hACE2-HRP tirpalo.
2. Į kiekvieną mėgintuvėlį įpilkite 6 μL kalibratorių, nežinomų mėginių, kokybės kontrolės ir gerai išmaišykite.
3. Perpilkite 100 μL kiekvieno mišinio, paruošto 2 veiksme, į atitinkamus mikroplokštelės šulinėlius pagal iš anksto nustatytą bandymo konfigūraciją.
3. Uždenkite plokštelę Plokštės sandarikliu ir inkubuokite 37 °C temperatūroje 60 minučių.
4. Nuimkite plokštelės sandariklį ir keturis kartus plaukite plokštelę maždaug 300 μL 1 × plovimo tirpalo kiekviename šulinyje.
5. Bakstelėkite lėkštę ant popierinio rankšluosčio, kad po plovimo šuliniuose pašalintumėte skysčio likučius.
6. Į kiekvieną šulinėlį įpilkite 100 μL TMB tirpalo ir 20 minučių inkubuokite plokštelę tamsoje 20–25°C temperatūroje.
7. Reakcijai sustabdyti į kiekvieną šulinėlį įpilkite 50 μL stabdymo tirpalo.
8. Per 10 minučių nuskaitykite absorbciją mikroplokštelių skaitytuve esant 450 nm (630 nm rekomenduojama naudoti kaip priedą, siekiant didesnio tikslumo).
