SARS-COV-2 neutralizuojantis antikūnų aptikimo rinkinys （ELISA)
【Numatytas naudojimas】
SARS-COV-2 neutralizuojantis antikūnų aptikimo rinkinys yra konkurencingas fermentų sujungtas imunosorbentų tyrimas (ELISA), skirtas kokybiniam ir pusiau kiekybiniam visam neutralizuojančių antikūnų nustatymui SARS-COV-2 žmogaus serume ir plazmoje. SARS-COV-2 neutralizuojantis antikūnų aptikimo rinkinys gali būti naudojamas kaip pagalba nustatant asmenis, turinčius adaptacinį imuninį atsaką į SARS-COV-2, nurodant naujausią ar ankstesnę infekciją. SARS-COV-2 neutralizuojantis antikūnų aptikimo rinkinys neturėtų būti naudojamas diagnozuojant ūmią SARS-COV-2 infekciją.
【Įvadas】
Koronavirusinės infekcijos paprastai sukelia neutralizuojančius antikūnų atsakus. Covidid-19 pacientų serokonversijos rodikliai yra atitinkamai 50% ir 100% 7 ir 14 dienos po simptomo. Norėdami pateikti žinias, atitinkamas viruso neutralizuojantis antikūnas kraujyje yra pripažintas kaip tikslas nustatant antikūnų efektyvumą ir didesnė neutralizuojančio antikūno koncentracija rodo didesnį apsaugos veiksmingumą. Apnašų redukcijos neutralizavimo testas (PRNT) buvo pripažintas kaip aukso standartas, skirtas aptikti neutralizuojančius antikūnus. Tačiau dėl mažo pralaidumo ir didesnio veikimo poreikio PRNT nėra praktiška didelio masto serodiagnozės ir vakcinų įvertinimui. SARS-COV-2 neutralizuojantis antikūnų aptikimo rinkinys yra pagrįstas konkurenciniu fermentais sujungtu imunosorbento tyrimo (ELISA) metodika, kuri gali aptikti neutralizuojantį antikūną kraujo mėginyje ir specialiai pasiekti šio tipo antikūnų koncentracijos lygius.
【Bandymo procedūra】
1. Atskiri vamzdeliai, 120 μl paruošto HACE2-HRP tirpalo alikvotinė dalis.
2.Padd 6 μl kalibratorių, nežinomi mėginiai, kokybės kontrolė kiekviename vamzdyje ir gerai išmaišykite.
3.Pasenkite 100 μl kiekvieno mišinio, paruošto 2 žingsnyje, į atitinkamus mikroplato šulinius pagal iš anksto sukurtą bandymo konfigūraciją.
3. Uždengkite plokštelę plokštelės sandarikliu ir inkubuokite 37 ° C temperatūroje 60 minučių.
4.Pulsuokite plokštelės sandariklį ir nuplaukite plokštelę apytiksliai 300 μl 1 x plovimo tirpalo šulinyje keturis kartus.
5.Pultuokite plokštelę ant popierinio rankšluosčio, kad po plovimo žingsnių šuliniuose pašalintumėte likutinį skystį.
6.Dr. 100 μl TMB tirpalo kiekvienam šuliniui ir inkubuokite plokštelę tamsoje 20–25 ° C temperatūroje 20 minučių.
7.Padd 50 μl STOP tirpalo kiekvienam šuliniui, kad sustabdytumėte reakciją.
8. Skaitykite absorbciją mikroplato skaitytuve esant 450 nm per 10 minučių (630 nm, kaip rekomenduojamas priedas, kad būtų aukštesnis tikslumas.
