SARS-COV-2
【ຫຼັກການ】
ເຄື່ອງຫມາຍ SARS-COV-2 ປິດການຊອກຄົ້ນຫາ AntiBody ແມ່ນອີງໃສ່ວິທີການແຂ່ງຂັນ Elisa.
ການນໍາໃຊ້ໂດເມນທີ່ຖືກປັບປຸງໃຫ້ບໍລິການ
Receptor Ace2, ການທົດສອບນີ້ຖືກອອກແບບມາເພື່ອເຮັດໃຫ້ໄວຣັດເປັນເຈົ້າພາບທີ່ປົກຄຸມ.
ການຈໍາຫນ່າຍ, ການຄວບຄຸມທີ່ມີຄຸນນະພາບ, ແລະ serum ຫຼືຕົວຢ່າງ plasma ແມ່ນປະສົມເຂົ້າກັນໄດ້ດີໃນການລະລາຍ
buffer ບັນຈຸ aliquoted hace2-hrp hrp ໃນທໍ່ຂະຫນາດນ້ອຍ. ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ການປະສົມໄດ້ຖືກຍົກຍ້າຍເຂົ້າ
microplate ນ້ໍາທີ່ມີການບັນຈຸ Immobilized Dismobilized Sars-Cov-2 RBD Shart (RBD) ສໍາລັບ
ບ່ອນ. ໃນລະຫວ່າງບ່ອນ 30 ນາທີ, antibody ສະເພາະຂອງ RBD ໃນ calibrators, qc ແລະ
ຕົວຢ່າງຈະແຂ່ງຂັນກັບ hace2-hrp ສໍາລັບການຜູກມັດສະເພາະການເຄື່ອນທີ່ RBD ທີ່ເຮັດໃນນ້ໍາສ້າງ. ຫຼັງຈາກ
ບ່ອນທີ່, ນ້ໍາສ້າງໄດ້ຖືກລ້າງ 4 ເທື່ອເພື່ອເອົາ hace2-hrp conjugate unbound. ການແກ້ໄຂຂອງ
ຫຼັງຈາກນັ້ນ TMB ຖືກເພີ່ມແລະປ້ອນໄວ້ປະມານ 20 ນາທີໃນອຸນຫະພູມໃນຫ້ອງ, ເຊິ່ງກໍ່ໃຫ້ເກີດການພັດທະນາຂອງກ
ສີຟ້າ. ການພັດທະນາສີແມ່ນຢຸດດ້ວຍການເພີ່ມ 1n hcl hcl, ແລະການດູດຊືມແມ່ນ
ການວັດແທກ Spectrophotometrictally ໃນເວລາ 450 NM. ຄວາມເຂັ້ມຂອງສີທີ່ສ້າງຕັ້ງຂຶ້ນແມ່ນອັດຕາສ່ວນກັບ
ຈໍານວນຂອງ enzyme ປະຈຸບັນ, ແລະມີຄວາມກ່ຽວຂ້ອງກັນກັບຈໍານວນມາດຕະຖານຂອງມາດຕະຖານທີ່ລ່ວງລະເມີດໃນແບບດຽວກັນ.
ໂດຍຜ່ານການປຽບທຽບກັບເສັ້ນໂຄ້ງການວັດແທກສ້າງຕັ້ງຂຶ້ນໂດຍ calibrators ທີ່ໃຫ້, ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ
ການທໍາຮ້າຍເຊື້ອໄຟໃນຕົວຢ່າງທີ່ບໍ່ຮູ້ຕົວແມ່ນຄິດໄລ່ແລ້ວ.
【ວັດສະດຸທີ່ຕ້ອງການແຕ່ບໍ່ໄດ້ສະຫນອງໃຫ້】
1. ນ້ໍາກັ່ນຫລືນ້ໍາ
2. ເຄື່ອງຫມາຍຄວາມແມ່ນຍໍາ: 10μl, 100μl, 200μlແລະ 1 ml
3. ເຄັດລັບ pipette ທີ່ຖືກຖິ້ມ
4. MicroPlate Reader ມີຄວາມສາມາດໃນການອ່ານໃນເວລາ 450nm.
5. ເຈ້ຍທີ່ດູດຊຶມ
.. ເຈ້ຍກາຟ
7. . Vortex mixer ຫຼືທຽບເທົ່າ
【ການເກັບກໍາຕົວຢ່າງແລະການເກັບຮັກສາ】
1. serum ແລະຕົວຢ່າງ plasma ເກັບກໍາເປັນທໍ່ທີ່ມີຖັງ K2-EDTA ສາມາດໃຊ້ສໍາລັບຊຸດນີ້.
2. ຕົວຢ່າງຄວນຈະຖືກເກັບໄວ້ແລະອາດຈະຖືກເກັບຮັກສາໄວ້ເຖິງ 48 ຊົ່ວໂມງທີ່ 2 ° C - 8 ° C ກ່ອນການຍືດ.
ຕົວຢ່າງທີ່ຖືໄວ້ເປັນເວລາດົນກວ່າ (ເຖິງ 6 ເດືອນ) ຄວນໄດ້ຮັບການແຊ່ແຂງພຽງຄັ້ງດຽວທີ່ A1 ° C ກ່ອນທີ່ຈະເປັນກ່ອນ.
ຫລີກລ້ຽງຮອບວຽນທີ່ບໍ່ມີປະໂຫຍດ.
ອະນຸສັນຍາ
【ການກະກຽມ reagent】
1. ປະຕິກິລິຍາທັງຫມົດຕ້ອງຖືກເອົາອອກຈາກຕູ້ເຢັນແລະອະນຸຍາດໃຫ້ກັບຄືນສູ່ອຸນຫະພູມໃນຫ້ອງກ່ອນທີ່ຈະໃຊ້
(20 °ເຖິງ 25 ° C). ບັນທຶກທຸກ reagents ໃນຕູ້ເຢັນເຢັນຫຼັງຈາກໃຊ້.
2. ຕົວຢ່າງທັງຫມົດແລະການຄວບຄຸມຄວນຈະ vortexed ກ່ອນທີ່ຈະໃຊ້.
3. ການກະກຽມການແກ້ໄຂຂອງ Hace2-HRP: Dorute Hace2-HRP Conferrate ໃນເວລາ 1: 51 ອັດຕາສ່ວນລະລາຍ
buffer. ຍົກຕົວຢ່າງ, ເຈືອຈາງ 100 ຂອງ hace2-hrp ສຸມໃສ່ທີ່ມີຂະຫນາດ 5.0ml ຂອງ HRP Diding Buffer
ເຮັດການແກ້ໄຂ hace2-hrp.
4. ການກະກຽມການແກ້ໄຂການແກ້ໄຂ 1 ×ລ້າງ: ເຈືອຈາງການແກ້ໄຂ 20 ×ລ້າງດ້ວຍນ້ໍາທີ່ບໍ່ສະບາຍຫລືກັ່ນດ້ວຍ
ອັດຕາສ່ວນສູດທີ 5:19. ຍົກຕົວຢ່າງ, ເຈືອຈາງ 20 ml ຂອງການແກ້ໄຂການລ້າງ 20 ml ກັບ 380 ml ຂອງ deionized ຫຼື
ນ້ໍາກັ່ນເພື່ອເຮັດໃຫ້ 400 ມລຂອງການແກ້ໄຂລ້າງ 100 ມລ.
【ຂັ້ນຕອນການທົດສອບ】
1. ໃນທໍ່ແຍກຕ່າງຫາກ, aliquot 120μlຂອງການແກ້ໄຂ hace2-hrp ທີ່ກຽມໄວ້.
2. ຕື່ມ 6 μlຂອງ calibrators, ຕົວຢ່າງທີ່ບໍ່ຮູ້, ຄວບຄຸມຄຸນນະພາບໃນແຕ່ລະທໍ່ແລະປະສົມເຂົ້າກັນດີ.
.. ການໂອນເງິນ100μlຂອງແຕ່ລະສ່ວນປະສົມທີ່ຖືກກະກຽມໃນຂັ້ນຕອນທີ 2 ເຂົ້າໃນ microplating ທີ່ສອດຄ້ອງກັນ
ການຕັ້ງຄ່າການສອບເສັງ PREDESSIGT.
3. ກວມເອົາແຜ່ນທີ່ມີ sealer ແຜ່ນແລະ incubate ຢູ່ທີ່ 37 ° C ເປັນເວລາ 30 ນາທີ.
. 4. ເອົາແຜ່ນ sealer ອອກແລະລ້າງຈານທີ່ມີປະມານ 300 μLຂອງການແກ້ໄຂ 1 × 1 ວິທີແກ້ໄຂລ້າງ 1 ຄັ້ງຕໍ່ Hellfor 4 ຄັ້ງ.
5. ແຕະແຜ່ນໃສ່ຜ້າເຊັດເຈ້ຍເພື່ອເອົາແຫຼວທີ່ຍັງເຫຼືອຢູ່ໃນນ້ໍາສ້າງພາຍຫຼັງການລ້າງຂັ້ນຕອນ.
6.
.. ເພີ່ມ 50 μLຂອງການແກ້ໄຂການຢຸດສໍາລັບແຕ່ລະອັນທີ່ດີທີ່ຈະຢຸດຕິການຕິກິຣິຍາ.
8. ອ່ານການດູດຊືມໃນ microplate reader ຢູ່ທີ່ 450 Nm ພາຍໃນ 10 ນາທີ (630NM ເປັນເຄຶ່ອງອຸປະກອນເສີມ
ແນະນໍາສໍາລັບການສະແດງຄວາມແມ່ນຍໍາສູງ).