SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit (ELISA)
【PRINCIP】
De SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit baséiert op kompetitiv ELISA Methodologie.
Benotzt gereinegt Rezeptorbindend Domain (RBD), Protein vum virale Spike (S) Protein an der Hostzell
Rezeptor ACE2, ass dësen Test entwéckelt fir d'Virus-Host neutraliséierend Interaktioun ze mimikéieren.
Kalibratoren, Qualitéitskontrollen a Serum- oder Plasma-Proben ginn individuell gutt a Verdünnung gemëscht
Puffer mat hACE2-HRP Konjugat aliquotéiert a klenge Réier. Dann ginn d'Mëschungen eran transferéiert
d'Mikroplate Wells mat immobiliséierter rekombinant SARS-CoV-2 RBD Fragment (RBD) fir
Inkubatioun. Wärend der 30-Minuten Inkubatioun ass de RBD spezifeschen Antikörper an de Kalibratoren, QC a
Echantillon wäerte mat der hACE2-HRP konkurréiere fir spezifesch Bindung vum RBD immobiliséiert an de Brunnen. Nach
d'Inkubatioun, d'Brunnen sinn 4 Mol gewäsch fir ongebonnen hACE2-HRP Konjugat ze läschen. Eng Léisung vun
TMB gëtt dann bäigefüügt an 20 Minutte bei Raumtemperatur inkubéiert, wat zu der Entwécklung vun engem
blo Faarf. D'Faarwentwécklung gëtt gestoppt mat der Zousatz vun 1N HCl, an d'Absorptioun ass
spektrofotometresch gemooss bei 450 nm. D'Intensitéit vun der geformt Faarf ass proportional zu der
Betrag vun Enzym präsent, an ass ëmgedréint Zesummenhang mat der Quantitéit vun Standarden an déi selwecht Manéier assayed.
Duerch Verglach mat der Kalibrierungskurve geformt vun de geliwwerte Kalibratoren, ass d'Konzentratioun vu
neutraliséierend Antikörper an der onbekannter Probe gëtt dann berechent.
【MATERIALEN NËMMEN MÉI NET geliwwert】
1. Destilléiert oder deioniséiertem Waasser
2. Präzisiounspipetten: 10μL, 100μL, 200μL an 1 mL
3. Wegwerf Pipette Tipps
4. Mikroplate Lieser fäeg fir Absorptioun op 450nm ze liesen.
5. Absorbent Pabeier
6. Grafik Pabeier
7. Wirbelmixer oder gläichwäerteg
【SPECIMEN SAMMEL AN LAGER】
1. Serum a Plasma Echantillon gesammelt an Réier mat K2-EDTA kann fir dëse Kit benotzt ginn.
2. Exemplairen sollen ofgedeckt ginn a kënne bis zu 48 Stonnen bei 2 °C - 8 °C virum Assay gelagert ginn.
Exemplare fir eng méi laang Zäit (bis zu 6 Méint) sollten nëmmen eemol bei -20 °C virum Assay gefruer ginn.
Vermeiden widderholl Afréiere-Thaw Zyklen.
PROTOCOL
【Reagens Virbereedung】
1. All Reagenz mussen aus der Kälte geholl ginn a virum Gebrauch op Raumtemperatur zréckgoen
(20° bis 25°C). Späichert all Reagenz direkt nom Gebrauch am Frigo.
2. All Echantillon a Kontrollen soll virum Gebrauch vortexed ginn.
3. hACE2-HRP Léisung Virbereedung: Verdënnt hACE2-HRP Konzentrat bei 1:51 Verdünnungsverhältnis mat Verdünnung
Buffer. Zum Beispill, verdënntem 100 μL hACE2-HRP Konzentrat mat 5,0 mL HRP Verdünnungsbuffer fir
eng hACE2-HRP Léisung maachen.
4. 1× Wash Solution Virbereedung: Verdünnt d'20× Wash Solution mat deioniséiertem oder destilléiertem Waasser mat engem
Volume Verhältnis vun 1:19. Zum Beispill verdünnt 20 ml 20 × Wäschléisung mat 380 ml deioniséierter oder
destilléiert Waasser fir 400 ml 1 × Wäschléisung ze maachen.
【Test Prozedur】
1. An getrennten Réier, aliquot 120μL vun der preparéierter hACE2-HRP Léisung.
2. Füügt 6 μL Kalibratoren, onbekannte Proben, Qualitéitskontrollen an all Röhre a mëschen gutt.
3. Transfert 100μL vun all Mëschung virbereet am Schrëtt 2 an entspriechend Mikroplate Wells
zu predesignéierten Testkonfiguratioun.
3. Deckt d'Plack mat Plate Sealer a inkubéiert bei 37 ° C fir 30 Minutten.
4. Ewechzehuelen de Plate Sealer a wäscht d'Plack mat ongeféier 300 μL vun 1 × Wash Solution pro Well fir véier Mol.
5. Tippen op d'Plack op Pabeierhandtuch fir d'Reschtflëssegkeet an de Brunnen no wäschen Schrëtt ze entfernen.
6. Füügt 100 μL TMB-Léisung op all Brunn an inkubéiert d'Plack an der Däischtert bei 20 - 25 ° C fir 20 Minutten.
7. Füügt 50 μL Stop Solution fir all Well fir d'Reaktioun ze stoppen.
8. Liest d'Absorptioun am Mikroplate Lieser bei 450 nm bannent 10 Minutten (630nm als Accessoire ass
recommandéiert fir méi héich Präzisioun Leeschtung).