Sars-COV-2 Антитело таблеткадан (Элиза) нейтралдаштыруу
【Принцип】
Сарс-ков-2 антитело табылгыс комплектинин бейтараптуулугун элиза методологиясына негизделген.
Viral Spike (лар) протеиндин жана хост клеткасынан алынган протеиндин, протеиндин протеинди колдонуу
Receptor ACE2, бул тест вирус-хосту нейтралдаштыруучу өз ара аракеттенүүнү туурап үчүн иштелип чыккан.
Калибраторлор, сапаттуу контролдор, сыворотниктер же плазма үлгүлөрү жекелештирилип жатканда жакшы аралашып жатышат
Hace2-Hace2-Hace2-Hace Conjugate камтылган буфер. Андан кийин аралашмалар өткөрүлүп берилет
кыймылсыз рекомбинанттык Сар-Ков-2 RBD фрагментинин (RBD) камтылган микроплия
Инкубация. 30 мүнөттүк инкубация учурунда калибраторлор, QC жана RBD конкреттүү антитело
Үлгүлөр скважиналарда RBD иммобилизациялаган конкреттүү милдеттүү милдеттүү милдеттүү милдеттүү милдеттүү милдеттүү милдеттүү милдеттенмелер үчүн Hace2-HRP менен атаандашат. Кийин
Инкубация, скважиналар сөөктү жок кылуу үчүн 4 жолу жууп салат2-HACE2-HRP конгугациясын жок кылышат. Чечим
Андан кийин КМБ бөлмө температурасында 20 мүнөт ичинде кошулуп, инкубацияланган, натыйжада а
Көк түс. 1n HCL кошуу менен түстү иштеп чыгуу токтотулат, ал эми соруу
450 нм деңгээлинде спектрофотетрикалык өлчөнөт. Түстөрдүн интенсивдүүлүгү пропорционалдуу
ферменттин суммасы, жана ошол эле жол менен камсыздандырылган стандарттардын суммасына тескери байланышкан.
Берилген калибраторлор тарабынан түзүлгөн калибрлөө ийри сызыгы менен салыштырып, концентрациялануу
Белгисиз үлгүдөгү антителолорду нейтралдаштыруу эсептелет.
【Керектүү материалдар, бирок берилген эмес】
1 тазаланган суу
2. Так түтүкчөлөрү: 10μl, 100μл, 200μл жана 1 мл
3. Таптама пипетка кеңештери
4. 450нм абсорбционацияга жөндөмдүү микроплодо окурман.
5. Сорсчуган кагаз
6. Кагаз
7. Vortex Mixer же ага барабар
【SPECIMEN Collection жана сактоо】
1. Бул топтом үчүн K2-EDTA камтыган түтүктөрдө чогултулган сывороткалар жана плазма үлгүлөрү колдонулат.
2. Экрелке жабуу керек жана камсыздандырууга чейин 2 ° C - 8 ° C чейин 48 саатка чейин сакталышы керек.
Бир аз убакытка созулган үлгүлөр (6 айга чейин) Assay чейин -20 ° C чейин бир гана жолу тоңуп калуу керек.
Бир нече жолу тоңдурулган тоңдурулган циклдерден алыс болуңуз.
Протокол
【Реагент даярдоо】
1. Бардык реагенттер муздатуудан алынып салынышы керек жана колдонуудан мурун бөлмө температурасына кайтууга уруксат берилет
(20 ° ден 25 ° C). Колдонулгандан кийин, бардык реагенттерди сактаңыз.
2. Бардык үлгүлөрдү жана башкаруу элементтери колдонууга чейин сак болушу керек.
3. Hace2-HRP чечими даярдоо: Dilute2-Hace2-HRP концентраты 1: 51 ниет катышы менен
Буфер. Мисалы, 100 μл of Hace2-Hace2-HRP концентратынын 5,0мл HRP дарегин саздуу буфери менен
Hace2-HRP чечимин жасаңыз.
4. 1 × Жуу боюнча Чечүү Даярдоо
Көлөмдүн катышы 1:19. Мисалы, болжол менен 20 мл жууп салыңыз, 380 мл бурулган же
суу жуугучту жууганга 400 мл.
【Тест процедурасы】
1. Өзүнчө түтүктөрдө, 120μл даярдалган Hace2-HRP чечими
2. 6 μл калибраторлорду кошуңуз, белгисиз үлгүлөр, ар бир түтүккө жана аралашманын сапатынын көзөмөлү.
3. Ар бир аралашманы 2-кадамга даярдалган микроплодук скважиналарга ылайыкташтырыңыз
сыноо конфигурациясын аныктоого болот.
3. Плитаны табак плиталар менен жаап, 30 мүнөткө 37 ° С менен тааныштырыңыз.
4
5. Скважиналарды жуугандан кийин кудуреттүү суюктукту алып салуу үчүн, кагаз сүлгү менен кагаз сүлгү менен табыңыз.
6. Ар бир сейил бейишке 100 ел слетка челегин кошуп, 20 мүнөткө чейин 20 мүнөткө чейин сүрөткө түшүңүз.
7. Реакцияны токтотуу үчүн, ар бир жакшылыктын ар бир жакшылыгын 50 μл алып салуу.
8. Микроплиядагы окурманга 450 нм, 10 мүнөт ичинде (630nm аксессуар болсо, 630nm)
жогорку тактык көрсөткүчтөрү үчүн сунушталат).