SARS-CoV-2 нейтралдаштыруучу антителолорду аныктоо комплекти (ELISA)
【КОЛДОНУУ】
SARS-CoV-2 нейтралдаштыруучу антителолорду аныктоо комплекти - бул адамдын сарысусунда жана плазмасында SARS-CoV-2ге карата жалпы нейтралдаштыруучу антителолорду сапаттык жана жарым сандык аныктоо үчүн арналган атаандаштыкка жөндөмдүү энзим менен байланышкан иммуносорбенттик анализ (ELISA). SARS-CoV-2 нейтралдаштыруучу антителолорду аныктоо комплекти SARS-CoV-2ге адаптацияланган иммундук реакциясы бар адамдарды аныктоодо жардам катары колдонулушу мүмкүн, бул жакында же мурунку инфекцияны көрсөтүүдө. SARS-CoV-2 нейтралдаштыруучу антителолорду аныктоо комплекти SARS-CoV-2 курч инфекциясын диагностикалоо үчүн колдонулбашы керек.
【КИРИШҮҮ】
Коронавирустук инфекциялар, адатта, антителолорду нейтралдаштыруучу жоопторду жаратат. Ковид-19 менен ооруган бейтаптардагы сероконверсия көрсөткүчү симптомдор башталгандан кийинки 7 жана 14-күнү тиешелүүлүгүнө жараша 50% жана 100% түзөт. Билимди көрсөтүү үчүн кандагы тиешелүү вирусту нейтралдаштыруучу антитело антителолордун эффективдүүлүгүн аныктоо үчүн максат катары таанылат жана нейтралдаштыруучу антителолордун жогорку концентрациясы коргоонун жогорку эффективдүүлүгүн көрсөтөт. Бляшкаларды азайтуу нейтралдаштыруу тести (PRNT) нейтралдаштыруучу антителолорду аныктоонун алтын стандарты катары таанылган. Бирок, анын төмөн өткөрүү жөндөмдүүлүгүнөн жана эксплуатацияга болгон жогорку талаптан улам, PRNT масштабдуу серодиагностика жана вакцинаны баалоо үчүн практикалык эмес. SARS-CoV-2 нейтралдаштыруучу антителолорду аныктоо комплекти атаандаштыкка жөндөмдүү энзим менен байланышкан иммуносорбент анализинин (ELISA) методологиясына негизделген, ал кан үлгүсүндөгү нейтралдаштыруучу антителолорду аныктай алат, ошондой эле антителолордун бул түрүнүн концентрациясынын деңгээлине өзгөчө кире алат.
【Сыноо процедурасы】
1. Өзүнчө түтүкчөлөргө даярдалган hACE2-HRP эритмесинен 120 мкл аликвот.
2.Ар бир түтүккө 6 мкл калибраторлорду, белгисиз үлгүлөрдү, сапатты көзөмөлдөөнү кошуп, жакшылап аралаштырыңыз.
2-кадамда даярдалган ар бир аралашмадан 3.Transfer 100μL алдын ала иштелип чыккан сыноо конфигурациясына ылайык, тиешелүү микропластинка кудуктарына.
3. Пластинаны Plate Sealer менен жаап, 37°C температурада 60 мүнөт инкубациялаңыз.
4. Plate Герметикти алып салыңыз жана пластинканы болжол менен 300 мкл 1× Жуу эритмеси менен ар бир скважинага төрт жолу жууңуз.
5.Таптанды кагаз сүлгүгө таптап, жуугандан кийин кудуктардагы суюктуктун калдыктарын алып салыңыз.
6.Ар бир кудукка 100 мкл TMB эритмесин кошуп, пластинканы караңгы жерде 20 – 25°C температурада 20 мүнөт инкубациялаңыз.
7.Реакцияны токтотуу үчүн ар бир кудукка 50 мкл Stop Solution кошуңуз.
8.10 мүнөттүн ичинде 450 нм микропластинанын абсорбенциясын окуңуз (630 нм кошумча тактык үчүн сунушталат).
