Маймыл чечек вирусун (MPV) нуклеиндик кислотаны аныктоочу комплект

Комплект 48 тестти же сапатты көзөмөлдөөнү иштетүү үчүн реагенттерди камтыйт, анын ичинде төмөнкү компоненттер:

Реагент А

РеагентB

Эскертүү: Ар кандай партия номерлеринин компоненттерин бири-бирин алмаштырып колдонууга болбойт

【Сактоо шарттары жана жарактуулук мөөнөтү】

1.Reagent A/B 2-30 °C сакталышы мүмкүн, ал эми сактоо мөөнөтү 10 ай.

2. Пробирканын капкагын сыноого даяр болгондо гана ачыңыз.

3. Пробиркаларды жарактуулук мөөнөтү өткөндөн кийин колдонбоңуз.

4.Агып кеткен аныктоочу түтүктү колдонбоңуз.

【Колдонулуучу аспап】

LC480 ПТР анализ системасы үчүн ылайыктуу, Gentier 48E Автоматтык ПТР талдоо системасы, ABI7500 ПТР талдоо системасы.

【Үлгү талаптары】

1.Applicable үлгү түрлөрү: тамак тампондорунун үлгүлөрү.

2. Үлгү алуу чечими:Текшерүүдөн кийин үлгүлөрдү алуу үчүн Hangzhou Testsea биологиясы чыгарган кадимки туздуу же Вирусту сактоочу түтүктү колдонуу сунушталат.

тамак тампон:эки тараптуу фарингалдык бадамча бездерин жана фарингектин арткы дубалын бир жолу колдонулуучу стерилдүү үлгү алуу тампону менен сүртүңүз, тампонду 3 мл үлгү алуу эритмеси бар түтүкчөгө чөмтүрүңүз, куйругун ыргытыңыз жана түтүктүн капкагын бекемдеңиз.

3.Sample сактоо жана жеткирүү:Сыналуучу үлгүлөр мүмкүн болушунча тезирээк текшерилиши керек.Ташуу температурасы 2 ~ 8 ℃ де сакталышы керек. 24 сааттын ичинде сыналышы мүмкүн болгон үлгүлөр 2 ℃ ~ 8 ℃ сакталышы мүмкүн жана үлгүлөрдү 24 сааттын ичинде сыноого мүмкүн эмес болсо, анда ал азыраак же бирдей деңгээлде сакталышы керек. -70 ℃ чейин (эгер -70 ℃ сактоо шарты жок болсо, аны -20 ℃ убактылуу сактоого болот), кайталанбаңыз

тоңдуруу жана эрүү.

4.Proper үлгү чогултуу, сактоо, жана ташуу бул буюмдун аткаруу үчүн абдан маанилүү болуп саналат.

【Сыноо ыкмасы】

1.Sample иштетүү жана үлгү кошуу

1.1 Үлгүлөрдү иштетүү

Жогорудагы үлгү алуу эритмени үлгүлөр менен аралаштыргандан кийин, үлгүдөн 30 мкл ДНК чыгаруу реагентинин түтүгүнө алып, аны бирдей аралаштырыңыз.

1.2 Жүктөө

20 мкл калыбына келтирүүчү реагент алып, аны MPV аныктоо реагентине кошуңуз, жогоруда иштетилген үлгүдөн 5 мкл кошуңуз (оң башкаруу жана терс башкаруу үлгүлөр менен параллелдүү иштетилет), түтүктүн капкагын жаап, 2000 айн/мин 10 центрифугада секунд.

2. ПЦР күчөтүү

2.1 Даярдалган ПТР пластинкасын/түтүкчөлөрүн флуоресценттик ПТР аспабына жүктөңүз, ар бир сыноо үчүн терс башкаруу жана оң башкаруу орнотулат.

2.2 Флуоресценттик каналды орнотуу:

1) MPV аныктоо үчүн FAM каналын тандаңыз;

2) Ички контролдук генди аныктоо үчүн HEX/VIC каналын тандаңыз;

3. Жыйынтыктарды талдоо

Негизги сызыкты терс башкаруунун флуоресценттик ийри сызыгынын эң жогорку чекитинен жогору кой.

4.Сапаты контролдоо

4.1 Терс башкаруу: FAM, HEX/VIC каналында Ct мааниси табылган жок, же Ct＞40；

4.2 Оң башкаруу: FAM, HEX/VIC каналында, Ct≤40;

4.3 Жогорудагы талаптар ошол эле экспериментте аткарылышы керек, антпесе тесттин натыйжалары жараксыз болуп саналат жана эксперимент кайталанышы керек.

【Бааны кесип】

Үлгү төмөнкү учурларда оң деп эсептелет: Максаттуу ырааттуулугу Ct≤40, Ички башкаруу гени Ct≤40.

【Жыйынтыктарды интерпретациялоо】

Сапатты контролдоодон өткөндөн кийин, колдонуучулар HEX/VIC каналында ар бир үлгү үчүн күчөтүү ийри сызыгынын бар-жоктугун текшериши керек, эгерде бар болсо жана Ct≤40 менен, бул ички башкаруу генинин ийгиликтүү күчөтүлгөнүн жана бул өзгөчө тесттин жарактуу экенин көрсөттү.Колдонуучулар кийинки анализге өтсө болот:

3.Ички контролдоо гени күчөгөн үлгүлөр үчүн (HEX/VIC

канал, Ct＞40, же күчөтүү ийри сызыгы жок), вирустук жүктүн аздыгы же ПЦР ингибиторунун болушу ийгиликсиздиктин себеби болушу мүмкүн, изилдөө үлгүлөрдү чогултуудан кайталанышы керек;

4. Позитивдүү үлгүлөр жана өстүрүлгөн вирус үчүн ички контролдун натыйжалары таасир этпейт;

Терс сыналган үлгүлөр үчүн ички контролду оң текшерүү керек, антпесе жалпы жыйынтык жараксыз болуп саналат жана үлгүлөрдү чогултуу кадамынан баштап экспертиза кайталанышы керек.