Sars-cov-2 Kitêba Deteksiyonê ya Nehfandî (Elisa)
【RÊZMAN】
Kîtara tespîtkirina antibody ya nehskirî ya nehsanî li ser bingeha metodolojiya Elisa ya pêşbazdar e.
Karanîna domaina purified ya navborî (RBD), proteîn ji proteîn (s) proteîn û hucreya mêvandar
Receptor Ace2, vê ceribandinê ji bo mîmyîna vîrusê-mêvandar-danûstendina bêalî tête çêkirin.
Calibrators, kontrolên kalîteyê, û nimûneyên serum an plasma bi dilşewatî bi dilxweşî têne hev kirin
Buffer di nav tubên piçûk de bi hace2-hrp conjugate re têkildar e. Dûv re tevlihev têne veguheztin
Kulîlkên mîkroplate yên ku di nav de parçeyek RBD ya SARS-COV-2 RBD-ê ya mektebînkirî (RBD) hene
incubation. Di navbêna 30 hûrdeman de, antibody ya taybetî ya RBD-ê di kalibrators, QC û
Dê nimûneyên bi Hace2-HRP re ji bo girêdana taybetî ya RBD ya ku di nav golikan de nemir e. Piştî
Incubation, Wells 4 caran têne şûştin ku konjugate ya Hace2-HRP-ê rakirin. Çareseriyek
TMB hingê 20 hûrdeman li germahiya odeyê tê zêdekirin û dorpêç kirin, di encamê de pêşveçûna a
rengê şîn. Pêşveçûna rengîn bi zêdebûna 1n HCL re tê rawestandin, û bêhnteng e
di 450 NM de spektrophotometrîkî pîvand. Zehfeya rengê ku hatî avakirin bi rê ve ye
mîqdara enzîmê ya heyî, û bi berevajî standardên ku bi heman awayî têne hesibandin ve girêdayî ye.
Bi berhevdana curvasyona calibrasyonê ya ku ji hêla kalibratorên peyda ve hatî avakirin, hebûna
Piştre antibodên nehfandî di nimûneya nediyar de tê hesibandin.
【Materyalên hewce ne lê nehatiye peyda kirin】
1. Ava distilandî an deionized
2. Pipise Pipision: 10μl, 100μl, 200μl û 1 ml
3 Tîpên Pipette
4. Xwendekarê mîkrobatê ku dikare bi 450nm ve were xwendin.
5 Kaxezê Absorbent
6. Kaxeza Grafikê
7. Mixer an wekhev
【Berhevkirin û hilanînê】
1. Serum û nimûneyên plazma ku di tubên ku K2-EDTA de K2-EDTA têne berhev kirin dikarin ji bo vê kitê werin bikar anîn.
2 Divê nimûneyên bêne girtin û dibe ku ji bo 4 ° C - 8 ° C li pêşiya danasînê were hilanîn.
Nimûneyên ku ji bo demek dirêj ve hatine girtin (heta 6 mehan) divê tenê carekê li -20 ° C were qewirandin.
Ji cyclesên belaş ên dubare dûr bixin.
Protokola
【Amadekirina Reagent】
1 Pêdivî ye ku hemî reagent ji sarincê werin derxistin û destûr bidin ku berî karanîna li germahiya odeyê vegere
(20 ° ber 25 ° C). Hemî reagents di sarincokê de piştî ku bikar bînin piştî karanîna.
2. Divê hemî nimûneyên û kontrol berî karanîna vortexê bin.
3. Amadekariya çareseriyê ya Hace2-HRP: Hace2-HRP cengal li 1: 51 rêjeya dilpumasyonê bi dilêşiyê
Buperf. Mînakî, 100 μl ya Hace2-HRP bi 5.0ml
çareseriyek hace2-hrp çêbikin.
4.
Rêjeya Volume 1:19. Mînakî, 20 ml ji 20 ml çareseriya şuştinê bi 380 ml ya deionized an
ava distilandî da ku 400 ml ji 1 × up çareseriya şuştinê bike.
【Prosedûra testê】
1. Di tubên cuda de, Aliquot 120μl çareseriya amadekar a Hace2-HRP.
2. 6 μl calibrators, nimûneyên nediyar, kontrolên kalîteyê di her tubê de zêde bikin û baş tevlihev bikin.
3. Ji 100-ê tevliheviyê veguhestin di pêngava 2-ê de li gorî başên mîkroplate yên têkildar li gorî
to mîhengê testê ya pêşbînkirî.
3 Bi çarşefê plakeyê bi çarçoweya plakeyê ve girêdin û ji bo 30 hûrdeman li 37 ° C bikin.
4
5 Tap bikin ku plakaya li ser kaxezê kaxezê bişopînin da ku piştî şuştina pênasan di nav pêlavan de rûnê rûnê.
6
7. 50 μl ji bo çareserkirina çareseriyê ji bo rawestandina reaksiyonê zêde bikin.
8. Di nav 10 hûrdeman de di nav 450 NM de di nav xwendevanên mîkroplatê de bixwînin (630NM wekî ku gihîştî ye
ji bo performansa rastîn ya bilind tê pêşniyar kirin).