SARS-CoV-2 Kit Detection Antibody Neutralizing (ELISA)
【RÊZMAN】
SARS-CoV-2 Kit Detection Antibody Neutralizing li ser bingeha metodolojiya ELISA ya pêşbaziyê ye.
Bikaranîna domaina girêdana receptorê ya paqijkirî (RBD), proteîna ji proteîna spîka vîrusê (S) û hucreya mêvandar.
receptor ACE2, ev ceribandin ji bo teqlîdkirina têkiliya bêbandorkirina vîrus-mêvandarê hatî çêkirin.
Kalibrator, Kontrolên Qalîteyê, û nimûneyên serum an plazmayê bi rengek ferdî di navhevkirinê de baş têne tevlihev kirin.
tampon ku di nav lûleyên piçûk de tê de hACE2-HRP konjugate vedihewîne. Piştre tevlihev têne veguheztin
bîrên mîkroplateyê yên ku tê de parçeyek RBD ya SARS-CoV-2 ya rekombînant a bêbandorkirî (RBD) ji bo
inkubasyon. Di dema înkubasyona 30-deqîqan de, antîbody taybetî RBD di kalibratoran de, QC û
Nimûne dê bi hACE2-HRP re ji bo girêdana taybetî ya RBD-ya ku di bîran de neguhezîne re pêşbaziyê bikin. Piştî
di înkubasyonê de, kanî 4 caran têne şuştin da ku konjugata hACE2-HRP ya negirêdayî were rakirin. Çareseriya
Dûv re TMB tê zêdekirin û 20 hûrdeman li germahiya odeyê tê avêtin, di encamê de pêşveçûna a
rengê şîn. Pêşveçûna rengan bi lêzêdekirina 1N HCl tê rawestandin, û vegirtin e
di 450 nm de bi spectrophotometrîkî tê pîvandin. Zêdebûna rengê ku hatî çêkirin li gorî ya
mîqdara enzîmê heyî, û berevajî wê bi pîvana standardên ku bi heman rengî têne ceribandin ve girêdayî ye.
Bi danberheva bi kêşeya kalibrasyonê ya ku ji hêla kalibratorên peydakirî ve hatî çêkirin, giraniya
Dûv re antîkorên bêbandorkirina di nimûneya nenas de têne hesibandin.
【PÊWISTIN LÊ NEHATINE】
1. Ava distîlkirî an jî deyonkirî
2. Pipetên rast: 10μL, 100μL, 200μL û 1 mL
3. Pêşniyarên pipetê yên avêtin
4. Xwendevana mîkroplateyê ku di 450nm de vegirtinê bixwîne.
5. Kaxezek avsorbent
6. Kaxez grafik
7. Vortex mixer an jî wekhev
【KOLEKIRINA MÎNAK Û PARASTINA】
1. Nimûneyên serum û plazmayê yên ku di lûleyên ku K2-EDTA tê de têne berhev kirin, dikarin ji bo vê kîtê werin bikar anîn.
2. Nimûne divê bêne girtin û berî ceribandinê heta 48 demjimêran di 2 °C - 8 °C de bêne hilanîn.
Nimûneyên ku ji bo demek dirêjtir têne girtin (heta 6 mehan) divê berî ceribandinê tenê carekê di -20 °C de bêne cemidandin.
Ji çerxên cemidî-germkirinê yên dubare dûr bixin.
PROTOKOL
【Amadekirina Reagent】
1. Pêdivî ye ku hemî reagent ji sarincokê werin derxistin û berî bikar bînin destûr bidin ku vegerin germahiya odeyê
(20 ° heta 25 ° C). Hemî reagentan piştî bikar anînê di cih de di sarincê de hilînin.
2. Divê hemî nimûne û kontrol berî bikar bînin vortexed.
3. Amadekirina Çareseriya hACE2-HRP: Konsantreya hACE2-HRP di 1: 51 rêjeya helandinê de bi Dilutionê re bişewitînin.
Tampon. Mînakî, 100 μL konsantrera hACE2-HRP bi 5.0 mL tampona Dilutionê ya HRP re bişewitînin.
çareseriyek hACE2-HRP çêbikin.
4. Amadekirina Çareseriya Şûştinê 1×: Çareseriya şuştinê ya 20× bi ava deionîzekirî an jî distîlkirî bi avek
rêjeya volume yên 1:19. Mînakî, 20 ml Çareya şuştinê ya 20× bi 380 ml ya deionized an
ava distîlkirî ji bo çêkirina 400 mL 1× Çareseriya Şûştinê.
【Pêvajoya Testê】
1. Di lûleyên cuda de, 120 μL ji Çareseriya hACE2-HRP ya amadekirî veqetînin.
2. 6 μL kalibrator, nimûneyên nenas, kontrolên kalîteyê di her lûleyê de zêde bikin û baş tevlihev bikin.
3. 100 μL ji her tevliheviyek ku di gava 2-an de hatî amadekirin veguhezînin bîrên mîkroplate yên têkildar li gorî
ji bo veavakirina testê ya pêşdizaynkirî.
3. Plateyê bi Plate Sealer veşêrin û 30 deqeyan di germahiya 37°C de bihêlin.
4. Peldanka Plateyê rakin û bi qasî 300 μL 1× Çareseriya Şuştinê li her bîrekê çar caran bişon.
5. Pelika li ser destmala kaxezê bixin da ku piştî gavên şuştinê şileka bermayî ya di bîran de derxînin.
6. 100 μL Çareseriya TMB li her bîrekê zêde bikin û plakaya 20 deqeyan di tariyê de di 20 - 25°C de bihêlin.
7. Ji bo rawestandina reaksiyonê 50 μL Çareseriya Rawestandinê li her bîrekê zêde bikin.
8. Di 450 nm de di nav 10 hûrdeman de vegirtinê di xwendevana mîkroplateyê de bixwînin (630 nm wekî amûrek e
ji bo performansa rastbûna bilindtir tê pêşniyar kirin).