SARS-CoV-2 중화 항체 검출 키트(ELISA)
【원칙]
SARS-CoV-2 중화 항체 검출 키트는 경쟁력 있는 ELISA 방법론을 기반으로 합니다.
정제된 수용체 결합 도메인(RBD)을 사용하여 바이러스 스파이크(S) 단백질과 숙주 세포의 단백질
수용체 ACE2를 사용하는 경우, 이 테스트는 바이러스-숙주 중화 상호작용을 모방하도록 설계되었습니다.
Calibrator, 정도관리, 혈청 또는 혈장 샘플을 개별적으로 희석하여 잘 혼합합니다.
작은 튜브에 분취된 hACE2-HRP 접합체를 함유하는 완충액. 그런 다음 혼합물이 다음으로 옮겨집니다.
고정된 재조합 SARS-CoV-2 RBD 단편(RBD)이 포함된 마이크로플레이트 웰
잠복. 30분 배양 동안 교정기의 RBD 특이적 항체, QC 및
샘플은 웰에 고정된 RBD에 대한 특이적 결합을 위해 hACE2-HRP와 경쟁하게 됩니다. 후에
인큐베이션 후, 웰을 4회 세척하여 결합되지 않은 hACE2-HRP 접합체를 제거합니다. 솔루션
그런 다음 TMB를 첨가하고 실온에서 20분간 배양하여
파란색. 1N HCl을 첨가하면 발색이 정지되고 흡광도는
450nm에서 분광광도계로 측정되었습니다. 형성된 색상의 강도는 색상에 비례합니다.
존재하는 효소의 양은 동일한 방식으로 분석된 표준의 양과 반비례합니다.
제공된 Calibrator에 의해 형성된 검량선과의 비교를 통해
그런 다음 알려지지 않은 샘플의 중화 항체가 계산됩니다.
【필수 자료이지만 제공되지 않음]
1. 증류수 또는 탈이온수
2. 정밀 피펫: 10μL, 100μL, 200μL 및 1mL
3. 일회용 피펫 팁
4. 450nm에서 흡광도를 읽을 수 있는 마이크로플레이트 리더.
5. 흡수지
6. 그래프 용지
7. 볼텍스 믹서 또는 이에 상응하는 것
【표본 수집 및 보관]
1. K2-EDTA가 들어있는 튜브에 수집된 혈청 및 혈장 샘플을 이 키트에 사용할 수 있습니다.
2. 검체는 뚜껑을 닫고 분석 전 2°C~8°C에서 최대 48시간 동안 보관할 수 있습니다.
장기간(최대 6개월) 보관된 검체는 분석 전 -20°C에서 한 번만 냉동해야 합니다.
반복적인 동결-해동 주기를 피하십시오.
규약
【시약 준비]
1. 모든 시약은 반드시 냉장고에서 꺼내 실온에 방치한 후 사용하세요.
(20°~25°C). 사용 후 즉시 모든 시약을 냉장고에 보관하십시오.
2. 모든 샘플과 대조물질은 사용하기 전에 와류되어야 합니다.
3. hACE2-HRP 용액 제조 : hACE2-HRP 농축액을 1:51 희석비로 희석하여 사용
완충기. 예를 들어, hACE2-HRP 농축액 100μL를 HRP 희석 완충액 5.0mL로 희석하여
hACE2-HRP 솔루션을 만들어 보세요.
4. 1× 세척 용액 준비: 20× 세척 용액을 탈이온수 또는 증류수로 희석합니다.
1:19의 볼륨 비율. 예를 들어, 20× 세척 용액 20mL를 탈이온수 380mL로 희석하거나
증류수를 사용하여 1× Wash Solution 400 mL를 만든다.
【테스트 절차]
1. 준비된 hACE2-HRP 용액 120μL를 별도의 튜브에 분주합니다.
2. 각 튜브에 6μL의 교정물질, 미지의 샘플, 품질 관리 물질을 추가하고 잘 혼합합니다.
3. 단계 2에서 준비한 각 혼합물 100μL를 다음과 같이 해당 마이크로플레이트 웰에 옮깁니다.
미리 설계된 테스트 구성으로.
3. 플레이트를 Plate Sealer로 덮고 37°C에서 30분간 배양합니다.
4. 플레이트 씰러를 제거하고 웰당 약 300μL의 1× 세척 용액으로 플레이트를 4회 세척합니다.
5. 세척 단계 후 웰에 남아 있는 액체를 제거하기 위해 종이 타월로 플레이트를 두드립니다.
6. TMB 용액 100 μL를 각 웰에 첨가하고 플레이트를 어두운 곳에서 20 - 25°C에서 20분간 배양합니다.
7. 각 웰에 Stop Solution 50μL를 추가하여 반응을 중지합니다.
8. 10분 이내에 450nm에서 마이크로플레이트 리더의 흡광도를 판독합니다(부속품은 630nm).
더 높은 정밀도 성능을 위해 권장됩니다).