SARS-COV-2 ತಟಸ್ಥಗೊಳಿಸುವ ಪ್ರತಿಕಾಯ ಪತ್ತೆ ಕಿಟ್ (ಎಲಿಸಾ)
【ತತ್ವ】
SARS-COV-2 ತಟಸ್ಥಗೊಳಿಸುವ ಪ್ರತಿಕಾಯ ಪತ್ತೆ ಕಿಟ್ ಸ್ಪರ್ಧಾತ್ಮಕ ಎಲಿಸಾ ವಿಧಾನವನ್ನು ಆಧರಿಸಿದೆ.
ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ರಿಸೆಪ್ಟರ್ ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಡೊಮೇನ್ (ಆರ್ಬಿಡಿ) ಅನ್ನು ಬಳಸುವುದು, ವೈರಲ್ ಸ್ಪೈಕ್ (ಎಸ್) ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮತ್ತು ಹೋಸ್ಟ್ ಸೆಲ್ನಿಂದ ಪ್ರೋಟೀನ್
ರಿಸೆಪ್ಟರ್ ಎಸಿಇ 2, ಈ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ವೈರಸ್-ಹೋಸ್ಟ್ ತಟಸ್ಥಗೊಳಿಸುವ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಅನುಕರಿಸಲು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಮಾಪನಾಂಕಕಾರಕಗಳು, ಗುಣಮಟ್ಟದ ನಿಯಂತ್ರಣಗಳು ಮತ್ತು ಸೀರಮ್ ಅಥವಾ ಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವಲ್ಲಿ ಚೆನ್ನಾಗಿ ಬೆರೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ
ಸಣ್ಣ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಆಲ್ಕ್ಯೂಟ್ ಮಾಡಲಾದ HACE2-HRP ಕಾಂಜುಗೇಟ್ ಹೊಂದಿರುವ ಬಫರ್. ನಂತರ ಮಿಶ್ರಣಗಳನ್ನು ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ
ಗಾಗಿ ನಿಶ್ಚಲವಾಗಿರುವ ಪುನರ್ಸಂಯೋಜಕ SARS-COV-2 RBD ತುಣುಕು (RBD) ಹೊಂದಿರುವ ಮೈಕ್ರೊಪ್ಲೇಟ್ ಬಾವಿಗಳು
ಕಾವು. 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾವು ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಕ್ಯಾಲಿಬ್ರೇಟರ್‌ಗಳಲ್ಲಿನ ಆರ್ಬಿಡಿ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರತಿಕಾಯ, ಕ್ಯೂಸಿ ಮತ್ತು
ಬಾವಿಗಳಲ್ಲಿ ನಿಶ್ಚಲವಾಗಿರುವ ಆರ್ಬಿಡಿ ಅನ್ನು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಬಂಧಿಸಲು ಮಾದರಿಗಳು HACE2-HRP ಯೊಂದಿಗೆ ಸ್ಪರ್ಧಿಸುತ್ತವೆ. ಹಿ ೦ ದೆ
ಕಾವು, ಬಾವಿಗಳನ್ನು 4 ಬಾರಿ ತೊಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅನ್ಬೌಂಡ್ ಹೇಸ್ 2-ಎಚ್‌ಆರ್‌ಪಿ ಸಂಯುಕ್ತವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುತ್ತದೆ. ನ ಪರಿಹಾರ
ನಂತರ ಟಿಎಂಬಿಯನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 20 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಎ
ನೀಲಿ ಬಣ್ಣ. 1 ಎನ್ ಎಚ್‌ಸಿಎಲ್ ಸೇರ್ಪಡೆಯೊಂದಿಗೆ ಬಣ್ಣ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯನ್ನು ನಿಲ್ಲಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯು
450 nm ನಲ್ಲಿ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೆಟ್ರಿಕ್ ಆಗಿ ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ರೂಪುಗೊಂಡ ಬಣ್ಣದ ತೀವ್ರತೆಯು ಅನುಪಾತದಲ್ಲಿರುತ್ತದೆ
ಕಿಣ್ವದ ಪ್ರಮಾಣ, ಮತ್ತು ಅದೇ ರೀತಿಯಲ್ಲಿ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲ್ಪಟ್ಟ ಮಾನದಂಡಗಳ ಪ್ರಮಾಣಕ್ಕೆ ವಿಲೋಮವಾಗಿ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ.
ಒದಗಿಸಿದ ಮಾಪನಾಂಕಕಾರಕರಿಂದ ರೂಪುಗೊಂಡ ಮಾಪನಾಂಕ ನಿರ್ಣಯ ರೇಖೆಯೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸುವ ಮೂಲಕ, ಸಾಂದ್ರತೆಯು
ಅಪರಿಚಿತ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ತಟಸ್ಥಗೊಳಿಸುವ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳನ್ನು ನಂತರ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ.
【ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಆದರೆ ಒದಗಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ】
1. ಬಟ್ಟಿ ಇಳಿಸಿದ ಅಥವಾ ಡಯೋನೈಸ್ಡ್ ನೀರು
2. ನಿಖರ ಪೈಪೆಟ್‌ಗಳು: 10μL, 100μL, 200μL ಮತ್ತು 1 ಮಿಲಿ
3. ಬಿಸಾಡಬಹುದಾದ ಪೈಪೆಟ್ ಸಲಹೆಗಳು
4. 450nm ನಲ್ಲಿ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯನ್ನು ಓದುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವಿರುವ ಮೈಕ್ರೊಪ್ಲೇಟ್ ರೀಡರ್.
5. ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ಕಾಗದ
6. ಗ್ರಾಫ್ ಪೇಪರ್
7. ಸುಳಿಯ ಮಿಕ್ಸರ್ ಅಥವಾ ಸಮಾನ
【ಮಾದರಿ ಸಂಗ್ರಹ ಮತ್ತು ಸಂಗ್ರಹಣೆ】
1. ಕೆ 2-ಇಡಿಟಿಎ ಹೊಂದಿರುವ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾದ ಸೀರಮ್ ಮತ್ತು ಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಈ ಕಿಟ್‌ಗಾಗಿ ಬಳಸಬಹುದು.
2. ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಮುಚ್ಚಬೇಕು ಮತ್ತು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡುವ ಮೊದಲು 48 ಗಂಟೆಗಳವರೆಗೆ 2 ° C - 8 ° C ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬಹುದು.
ಹೆಚ್ಚು ಸಮಯದವರೆಗೆ (6 ತಿಂಗಳವರೆಗೆ) ಹೊಂದಿರುವ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನಕ್ಕೆ ಮುಂಚಿತವಾಗಿ -20 ° C ಗೆ ಒಮ್ಮೆ ಮಾತ್ರ ಹೆಪ್ಪುಗಟ್ಟಬೇಕು.
ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಫ್ರೀಜ್-ಕರಗಿಸುವ ಚಕ್ರಗಳನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ.
ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್
【ಕಾರಕ ಸಿದ್ಧತೆ】
1. ಎಲ್ಲಾ ಕಾರಕಗಳನ್ನು ಶೈತ್ಯೀಕರಣದಿಂದ ಹೊರತೆಗೆಯಬೇಕು ಮತ್ತು ಬಳಕೆಯ ಮೊದಲು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶಕ್ಕೆ ಮರಳಲು ಅನುಮತಿಸಬೇಕು
(20 ° ರಿಂದ 25 ° C). ಬಳಕೆಯ ನಂತರ ಎಲ್ಲಾ ಕಾರಕಗಳನ್ನು ರೆಫ್ರಿಜರೇಟರ್‌ನಲ್ಲಿ ಉಳಿಸಿ.
2. ಎಲ್ಲಾ ಮಾದರಿಗಳು ಮತ್ತು ನಿಯಂತ್ರಣಗಳನ್ನು ಬಳಸುವ ಮೊದಲು ಸುಳಿಯಬೇಕು.
3. HACE2-HRP ಪರಿಹಾರ ತಯಾರಿಕೆ: HACE2-HRP ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು 1: 51 ನಲ್ಲಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯೊಂದಿಗೆ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವ ಅನುಪಾತದಲ್ಲಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಿ
ಬಫರ್. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, 5.0 ಮಿಲಿ ಎಚ್‌ಆರ್‌ಪಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವ ಬಫರ್‌ನೊಂದಿಗೆ 100 μl HACE2-HRP ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಿ
HACE2-HRP ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಮಾಡಿ.
4. 1 × ವಾಶ್ ಪರಿಹಾರ ತಯಾರಿಕೆ: 20 × ವಾಶ್ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಡಯೋನೈಸ್ಡ್ ಅಥವಾ ಬಟ್ಟಿ ಇಳಿಸಿದ ನೀರಿನಿಂದ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಿ
1:19 ರ ಪರಿಮಾಣ ಅನುಪಾತ. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, 380 ಮಿಲಿ ಡಯೋನೈಸ್ಡ್ ಅಥವಾ 20 × ವಾಶ್ ದ್ರಾವಣವನ್ನು 20 ಮಿಲಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಿ ಅಥವಾ
1 × ವಾಶ್ ದ್ರಾವಣವನ್ನು 400 ಮಿಲಿ ಮಾಡಲು ಬಟ್ಟಿ ಇಳಿಸಿದ ನೀರು.
【ಪರೀಕ್ಷಾ ವಿಧಾನ】
1. ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಕೊಳವೆಗಳಲ್ಲಿ, ತಯಾರಾದ HACE2-HRP ದ್ರಾವಣದ ಆಲ್ಕೋಟ್ 120μL.
2. 6 μL ಕ್ಯಾಲಿಬ್ರೇಟರ್‌ಗಳು, ಅಪರಿಚಿತ ಮಾದರಿಗಳು, ಪ್ರತಿ ಟ್ಯೂಬ್‌ನಲ್ಲಿ ಗುಣಮಟ್ಟದ ನಿಯಂತ್ರಣಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ.
3. ಹಂತ 2 ರಲ್ಲಿ ತಯಾರಿಸಿದ ಪ್ರತಿ ಮಿಶ್ರಣದ 100μL ಅನ್ನು ಅನುಗುಣವಾದ ಮೈಕ್ರೊಪ್ಲೇಟ್ ಬಾವಿಗಳಿಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಿ
ಪೂರ್ವನಿರ್ಧರಿತ ಪರೀಕ್ಷಾ ಸಂರಚನೆಗೆ.
3. ಪ್ಲೇಟ್ ಸೀಲರ್ನೊಂದಿಗೆ ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಮುಚ್ಚಿ ಮತ್ತು 37 ° C ಗೆ 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಿ.
4. ಪ್ಲೇಟ್ ಸೀಲರ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ ಮತ್ತು ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಸುಮಾರು 300 μL 1 × ವಾಶ್ ದ್ರಾವಣದಿಂದ ನಾಲ್ಕು ಬಾರಿ ತೊಳೆಯಿರಿ.
5. ಹಂತಗಳನ್ನು ತೊಳೆಯುವ ನಂತರ ಬಾವಿಗಳಲ್ಲಿ ಉಳಿದಿರುವ ದ್ರವವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಪೇಪರ್ ಟವೆಲ್ ಮೇಲೆ ಪ್ಲೇಟ್ ಟ್ಯಾಪ್ ಮಾಡಿ.
6. ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ 100 μL ಟಿಎಂಬಿ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು 20 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 20 - 25 ° C ಗೆ ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಕತ್ತಲೆಯಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಿ.
7. ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ನಿಲ್ಲಿಸಲು ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ 50 μl ಸ್ಟಾಪ್ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ.
8. ಮೈಕ್ರೊಪ್ಲೇಟ್ ರೀಡರ್ನಲ್ಲಿ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯನ್ನು 450 ಎನ್ಎಂನಲ್ಲಿ 10 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ ಓದಿ (ಆಕ್ಸೆಸರಿಯಂತೆ 630 ಎನ್ಎಂ
ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿಖರ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಗಾಗಿ ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ).