SARS-Cov-2 ឧបករណ៍អព្យាក្រឹតភាពអង្គបដិប្រាណអង្គបដិប្រាណ (អេលីសា)
ឹមកោលការន៍ឹម
ឧបករណ៍រាវរកអង្គបដិប្រាណអេឡិចត្រូនិចអេសអេស 2 គឺផ្អែកលើវិធីសាស្ត្ររបស់អេលីសាដែលមានការប្រកួតប្រជែង។
ការប្រើប្រាស់ដែនភ្ជាប់ការទទួលបានការបន្សុតដែលបានបន្សុត (RBD) ប្រូតេអ៊ីនពីប្រូតេអ៊ីនដែលមានរលកអាកាសនិងកោសិកាម៉ាស៊ីន
Ace2 ទទួលយក ACE2 ការធ្វើតេស្តនេះត្រូវបានរចនាឡើងដើម្បីធ្វើត្រាប់តាមអន្តរកម្មបន្សាបខ្លួនរបស់ម៉ាស៊ីនមេរោគដែលមានមេរោគ។
អ្នកត្រួសត្រាយការត្រួតពិនិត្យគុណភាពនិងសេរ៉ូមឬគំរូប្លាស្មាត្រូវបានលាយបញ្ចូលគ្នាជាលក្ខណៈបុគ្គលក្នុងការរំលាយ
សតិបណ្ដោះអាសន្នមានហ៊ុក 2 - អេហ្វភីភីភ្ជាប់យ៉ាងខ្លាំងក្នុងបំពង់តូចៗ។ បន្ទាប់មកល្បាយត្រូវបានផ្ទេរចូល
អណ្តូងមីក្រូវ៉េវដែលមានបំណែកដែលមានរាងពងក្រពើដែលមិនមានជាតិខ្លាញ់
ការភ្ញាស់។ ក្នុងអំឡុងពេលនៃការភ្ញាស់រយៈពេល 30 នាទី, អង្គបដិប្រាណជាក់លាក់ RBD នៅក្នុងម៉ាស៊ីនក្រណាត់ក្រេឌីត, qc និង
គំរូនឹងប្រកួតប្រជែងជាមួយ Hace2-HRP សម្រាប់ការចងជាក់លាក់របស់ RBD Imamobilized Imamobilized នៅក្នុងអណ្តូង។ បន្ទាប់
ការភ្ញាស់អណ្តូងទឹកត្រូវបានទឹកនាំទៅ 4 ដងដើម្បីយកចេញដោយមិនដឹងខ្លួននៅលើ Hace2-HRP រួមបញ្ចូលគ្នា។ ដំណោះស្រាយនៃ
បន្ទាប់មក TMB ត្រូវបានបន្ថែមនិង incubated រយៈពេល 20 នាទីនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ដែលជាលទ្ធផលនៃការអភិវឌ្ឍនៃក
ពណ៌ខៀវ។ ការអភិវឌ្ឍពណ៌ត្រូវបានបញ្ឈប់ដោយការបន្ថែម HCL 1N HCL ហើយការស្រូបយកគឺ
វាស់ SpectophotometomTomomMetomTricom នៅ 450 អិម។ អាំងតង់ស៊ីតេនៃពណ៌ដែលបានបង្កើតឡើងគឺសមាមាត្រទៅនឹងឯកសារ
ចំនួនទឹកប្រាក់នៃអង់ស៊ីមដែលមានវត្តមានហើយមានទំនាក់ទំនងយ៉ាងខ្លាំងចំពោះចំនួនស្តង់ដារដែលបានអះអាងដូចគ្នា។
តាមរយៈការប្រៀបធៀបជាមួយនឹងខ្សែកោងក្រិតក្រវ៉ាត់ដែលបង្កើតឡើងដោយក្រវ៉ាត់ដែលបានផ្តល់ការផ្តោតអារម្មណ៍របស់
អព្យាក្រឹតភាពអង្គបដិប្រាណក្នុងគំរូដែលមិនស្គាល់ត្រូវបានគណនា។
ឹមវត្ថុធាតុដើមដែលត្រូវការប៉ុន្តែមិនបានផ្តល់ឹម
1 ។ ទឹកសន្សើមឬទឹក
2 ។ បំពង់បង្ហូរទឹកភាពជាក់លាក់: 10μl, 100μl, 200μlនិង 1 មីលីលីត្រ
3 ។ ជំនួយបំពង់បំពង់ចោល
4 ។ អ្នកអាន Microplate សមត្ថភាពក្នុងការអានការស្រូបយកនៅ 450nm ។
5 ។ ក្រដាសស្រូបយក
6 ។ ក្រដាសក្រាហ្វ
7 ។ ឧបករណ៍លាយ Vortex ឬសមមូល
ឹមការប្រមូលនិងរក្សាទុកគំរូឹម
1 ។ គំរូរបស់សេរ៉ូមនិងប្លាស្មាបានប្រមូលក្នុងបំពង់ដែលមាន K2-Edta អាចត្រូវបានប្រើសម្រាប់ឧបករណ៍នេះ។
2 ។ គំរូគួរតែត្រូវបានកំណត់ហើយអាចត្រូវបានរក្សាទុកសម្រាប់រយៈពេលរហូតដល់ 48 ម៉ោងនៅ 2 អង្សាសេ - 8 អង្សាសេមុនការអះអាង។
គំរូបានប្រារព្ធធ្វើក្នុងរយៈពេលយូរ (រហូតដល់ 6 ខែ) គួរតែត្រូវបានកកតែក្នុងមួយ -20 អង្សាសេមុនពេលដែលត្រូវបានអះអាង។
ជៀសវាងវដ្តដែលបង្កកម្តងហើយម្តងទៀត។
ពិធីតេកូ
ឹមការរៀបចំ Reagent ឡើងវិញឹម
1 ។ រាល់ការ reagents ត្រូវតែដកចេញពីទូរទឹកកកនិងត្រូវបានអនុញ្ញាតឱ្យត្រឡប់ទៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់មុនពេលប្រើ
(20 °ទៅ 25 អង្សាសេ) ។ រក្សាទុករាល់ការ reagents ទាំងអស់នៅក្នុងទូទឹកកកភ្លាមៗបន្ទាប់ពីប្រើរួច។
2 ។ គំរូនិងវត្ថុបញ្ជាទាំងអស់គួរតែត្រូវបាន vortexed មុនពេលប្រើ។
ការរៀបចំរបស់ Hace2-HRP: dilute hace2-hrp ផ្តោតលើការផ្តោតអារម្មណ៍នៅលេខ 1: 51 សមាមាត្រនៃការរំលាយជាមួយនឹងការរំលាយ
បុរេបយកដៃ។ ឧទាហរណ៍ dilute 100 μlនៃ Hace2-HRP ផ្តោតអារម្មណ៍ជាមួយនឹងសតិបណ្ដោះអាសន្នដែលមានបន្ទុកឡើងវិញ
ធ្វើឱ្យដំណោះស្រាយហ៊ុក 2 -HPP ។
4 ។ 1 ។ 1 ur ក្នុងការត្រៀមរៀបចំដំណោះស្រាយ: ពនលាយទំហំ 20 ~ ដំណោះស្រាយដែលមានទឹក inionized ឬទឹកក្រឡុកជាមួយក
សមាមាត្របរិមាណ 1:19 ។ ឧទាហរណ៍ពនលាយ 20 មីលីលីត្រនៃ 20 ×លាងសមាតដំណោះស្រាយជាមួយ Deionized 380 ម។ ល
ទឹកសាបដើម្បីធ្វើឱ្យ 400 មីលីលីត្រនៃ 1 ×ស្ទេសលាងសម្អាត។
ឹមនីតិវិធីតេស្តឹម
1 ។ ក្នុងបំពង់ដាច់ដោយឡែក, ក្រៅពីដំណោះស្រាយនៃការត្រៀមលក្ខណៈ HRACE2-HRP ។
2 ។ បន្ថែម 6 μlនៃក្រេឌីតគំរូមិនស្គាល់ការត្រួតពិនិត្យគុណភាពក្នុងបំពង់នីមួយៗនិងលាយឱ្យបានល្អ។
3 ។ ការផ្ទេរប្រាក់ 100 វិនាទីនៃល្បាយនីមួយៗដែលបានរៀបចំនៅជំហ៊ានទី 2 ទៅអណ្តូងមីក្រូវ៉េវដែលត្រូវគ្នា
ដើម្បីកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធតេស្តកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធជាមុន។
3 ។ គ្របដណ្តប់ចានដែលមានម៉ាស៊ីនផ្សាភ្ជាប់ចាននិង incubate នៅ 37 អង្សាសេរយៈពេល 30 នាទី។
4 ។ យកម៉ាស៊ីនផ្សាភ្ជាប់ចានចេញហើយលាងសមាតចានដោយប្រើប្រមាណ 300 μlនៃ 1 សូលុយស្យុងក្នុងមួយម៉ោង 4 ដង។
5 ។ ប៉ះចាននៅលើកន្សែងក្រដាសដើម្បីយកវត្ថុរាវដែលនៅសេសសល់ក្នុងអណ្តូងបន្ទាប់ពីការលាងជណ្តើរ។
6 ។ បន្ថែមដំណោះស្រាយ TMB 100 μμlនៃដំណោះស្រាយនីមួយៗយ៉ាងល្អនិងភ្ញាស់ចាននៅទីងងឹតដែលមានអាយុ 20 - 25 អង្សាសេរយៈពេល 20 នាទី។
7 ។ បន្ថែមដំណោះស្រាយបញ្ឈប់ 50 μllសម្រាប់ជីវភាពនីមួយៗដើម្បីបញ្ឈប់ប្រតិកម្ម។
8 ។ អានការស្រូបយកក្នុងកម្មវិធីអាន Microplate នៅ 450 អិមក្នុងរយៈពេល 10 នាទី (630 អ៉ីមជាគ្រឿងបន្លាស់គឺ
បានណែនាំសម្រាប់ការអនុវត្តភាពជាក់លាក់ខ្ពស់ជាងនេះ) ។