SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit (ELISA)

【មានបំណងប្រើ】

SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit គឺជាកម្មវិធី Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) ដែលមានបំណងសម្រាប់ការរកឃើញប្រកបដោយគុណភាព និងពាក់កណ្តាលបរិមាណនៃអង្គបដិប្រាណអព្យាក្រឹតសរុបចំពោះ SARS-CoV-2 នៅក្នុងសេរ៉ូម និងប្លាស្មារបស់មនុស្ស។ ឧបករណ៍រកឃើញអង្គបដិប្រាណ SARS- CoV-2 Neutralizing អាចត្រូវបានប្រើជាជំនួយក្នុងការកំណត់អត្តសញ្ញាណបុគ្គលដែលមានការឆ្លើយតបនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំទៅនឹង SARS- CoV-2 ដែលបង្ហាញពីការឆ្លងថ្មីៗ ឬពីមុន។ ឧបករណ៍រកឃើញអង្គបដិប្រាណអព្យាក្រឹត SARS-CoV-2 មិនគួរត្រូវបានប្រើដើម្បីធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យការឆ្លងមេរោគ SARS-CoV-2 ស្រួចស្រាវនោះទេ។

【ការណែនាំ】

ការឆ្លងមេរោគ Coronavirus ជាធម្មតាបណ្តាលឱ្យមានការឆ្លើយតបនឹងអង់ទីករអព្យាក្រឹត។ អត្រានៃការបំប្លែងសារជាថ្មីក្នុងអ្នកជំងឺ COVID-19 គឺ 50% និង 100% នៅថ្ងៃ 7 និង 14 ក្រោយរោគសញ្ញាចាប់ផ្តើមរៀងៗខ្លួន។ ដើម្បីបង្ហាញចំណេះដឹង អង់ទីករអព្យាក្រឹតនៃមេរោគដែលត្រូវគ្នាក្នុងឈាម គឺជាគោលដៅសម្រាប់កំណត់ប្រសិទ្ធភាពអង្គបដិប្រាណ និងការប្រមូលផ្តុំខ្ពស់នៃអង្គបដិប្រាណអព្យាក្រឹតបង្ហាញពីប្រសិទ្ធភាពការពារខ្ពស់ជាង។ ការធ្វើតេស្តអព្យាក្រឹតការកាត់បន្ថយបន្ទះ (PRNT) ត្រូវបានទទួលស្គាល់ថាជាស្តង់ដារមាសសម្រាប់ការរកឃើញអង្គបដិបក្ខអព្យាក្រឹត។ ទោះបីជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ដោយសារតែចរន្តទាបរបស់វា និងតម្រូវការខ្ពស់សម្រាប់ប្រតិបត្តិការ PRNT មិនអាចអនុវត្តបានសម្រាប់ការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យ និងវាយតម្លៃវ៉ាក់សាំងខ្នាតធំនោះទេ។ ឧបករណ៍រកឃើញអង្គបដិប្រាណ SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody គឺផ្អែកលើវិធីសាស្ត្រ Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) ដែលអាចរកឃើញអង្គបដិប្រាណអព្យាក្រឹតនៅក្នុងគំរូឈាម ក៏ដូចជាចូលមើលកម្រិតកំហាប់នៃអង្គបដិប្រាណប្រភេទនេះ។

 【នីតិវិធីសាកល្បង】

1. នៅក្នុងបំពង់ដាច់ដោយឡែក aliquot 120μLនៃដំណោះស្រាយ hACE2-HRP ដែលបានរៀបចំ។

2. បន្ថែម 6 μL នៃ calibrators, គំរូមិនស្គាល់, ការត្រួតពិនិត្យគុណភាពនៅក្នុងបំពង់គ្នានិងលាយផងដែរ។

3.ផ្ទេរ 100μL នៃល្បាយនីមួយៗដែលបានរៀបចំក្នុងជំហានទី 2 ទៅក្នុងអណ្តូង microplate ដែលត្រូវគ្នា យោងទៅតាមការកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធសាកល្បងដែលបានរៀបចំទុកជាមុន។

3. គ្របចានជាមួយ Plate Sealer និង incubate នៅសីតុណ្ហភាព 37°C រយៈពេល 60 នាទី។

4. យក Plate Sealer ចេញ ហើយលាងចានជាមួយនឹងទឹកប្រហែល 300 μL នៃ 1× Wash Solution ក្នុងមួយអណ្តូងចំនួន 4 ដង។

5. ប៉ះចាននៅលើកន្សែងក្រដាសដើម្បីយករាវដែលនៅសេសសល់នៅក្នុងអណ្តូងបន្ទាប់ពីជំហានលាង។

6. បន្ថែម 100 μL នៃ TMB Solution ទៅអណ្តូងនីមួយៗ ហើយដាក់ចានក្នុងទីងងឹតនៅសីតុណ្ហភាព 20 – 25°C រយៈពេល 20 នាទី។

7. បន្ថែម 50 μLនៃដំណោះស្រាយបញ្ឈប់ទៅអណ្តូងនីមួយៗដើម្បីបញ្ឈប់ប្រតិកម្ម។

8.Read absorbance នៅក្នុង microplate reader នៅ 450 nm ក្នុងរយៈពេល 10 នាទី (630nm ជាគ្រឿងបន្លាស់ត្រូវបានណែនាំសម្រាប់ការអនុវត្តភាពជាក់លាក់ខ្ពស់។