SARS-CoV-2 бейтараптандыратын антиденелерді анықтау жинағы (ELISA)
【МАҚСАТТЫ ҚОЛДАНУ】
SARS-CoV-2 бейтараптандыратын антиденелерді анықтау жинағы адам сарысуы мен плазмасындағы SARS-CoV-2-ге жалпы бейтараптандыратын антиденелерді сапалы және жартылай сандық анықтауға арналған бәсекеге қабілетті ферментпен байланысты иммуносорбентті талдау (ELISA) болып табылады. SARS-CoV-2 бейтараптандыратын антиденелерді анықтау жинағы SARS-CoV-2-ге бейімделген иммундық реакциясы бар адамдарды анықтауда көмекші құрал ретінде пайдаланылуы мүмкін, бұл жақында немесе бұрынғы инфекцияны көрсетеді. SARS-CoV-2 бейтараптандыратын антиденелерді анықтау жинағы SARS-CoV-2 жедел инфекциясын диагностикалау үшін пайдаланылмауы керек.
【КІРІСПЕ】
Коронавирустық инфекциялар әдетте бейтараптандыратын антиденелердің реакциясын тудырады. COVID-19 пациенттеріндегі сероконверсия көрсеткіштері симптом басталғаннан кейінгі 7 және 14-ші күні сәйкесінше 50% және 100% құрайды. Білімді ұсыну үшін қандағы сәйкес вирусты бейтараптандыратын антидене антиденелердің тиімділігін анықтау мақсаты ретінде танылады және бейтараптандыратын антиденелердің жоғары концентрациясы қорғаныс тиімділігінің жоғарылығын көрсетеді. Бляшкаларды азайтуды бейтараптандыру сынағы (PRNT) бейтараптандыратын антиденелерді анықтаудың алтын стандарты ретінде танылды. Дегенмен, оның төмен өткізу қабілетіне және жұмысқа қойылатын жоғары талаптарға байланысты PRNT кең ауқымды серодиагностика және вакцинаны бағалау үшін практикалық емес. SARS-CoV-2 бейтараптандыратын антиденелерді анықтау жинағы қан үлгісінде бейтараптандыратын антиденені анықтай алатын, сондай-ақ антидененің осы түрінің концентрация деңгейіне арнайы қол жеткізе алатын бәсекелес ферментпен байланысты иммуносорбентті талдау (ELISA) әдістемесіне негізделген.
【Сынақ процедурасы】
1. Бөлек түтіктерде дайындалған hACE2-HRP ерітіндісінің 120 мкл аликвоты.
2. Әр түтікке 6 мкл калибраторларды, белгісіз үлгілерді, сапаны бақылау элементтерін қосып, жақсылап араластырыңыз.
3. 2-қадамда дайындалған әрбір қоспаның 100 мкл мөлшерін алдын ала әзірленген сынақ конфигурациясына сәйкес микропластиналық ұңғымаларға тасымалдаңыз.
3. Пластинаны пластинаны тығыздағышпен жабыңыз және 37°C температурада 60 минут бойы инкубациялаңыз.
4.Плита тығыздағышын алып тастаңыз және пластинаны әр ұңғымаға шамамен 300 мкл 1× жуу ерітіндісімен төрт рет жуыңыз.
5. Жуу қадамдарынан кейін шұңқырлардағы қалдық сұйықтықты кетіру үшін тақтаны қағаз сүлгіге түртіңіз.
6. Әрбір ұңғымаға 100 мкл TMB ерітіндісін құйыңыз және пластинаны қараңғы жерде 20 – 25°C температурада 20 минут бойы инкубациялаңыз.
7.Реакцияны тоқтату үшін әрбір ұңғымаға 50 мкл тоқтату ерітіндісін қосыңыз.
8. 10 минут ішінде микропластиналарды оқу құрылғысында 450 нм абсорбцияны оқыңыз (дәлдігі жоғарырақ жұмыс істеу үшін керек-жарақ ретінде 630 нм ұсынылады.
