Маймыл шешек вирусын (MPV) нуклеин қышқылын анықтау жинағы

Жинақта 48 сынақты өңдеуге немесе сапаны бақылауға арналған реагенттер, соның ішінде келесі компоненттер бар:

Реагент А

РеагентB

Ескертпе: Әртүрлі топтама нөмірлерінің құрамдастарын бір-бірінің орнына пайдалануға болмайды

【Сақтау шарттары және сақтау мерзімі】

1.А/В реагентін 2-30°C температурада сақтауға болады, ал сақтау мерзімі 10 ай.

2. Пробирка қақпағын тек сынаққа дайын болғанда ғана ашыңыз.

3. Жарамдылық мерзімі өткен пробиркаларды қолданбаңыз.

4. Ағып кетуді анықтау түтігін пайдаланбаңыз.

【Қолданылатын құрал】

LC480 ПТР талдау жүйесі, Gentier 48E автоматты ПТР талдау жүйесі, ABI7500 ПТР талдау жүйесі үшін қолайлы.

【Үлгіге қойылатын талаптар】

1. Қолданылатын үлгі түрлері: жұлдыру жағындыларының үлгілері.

2. Үлгі алу ерітіндісі:Тексеруден кейін үлгі жинау үшін Hangzhou Testsea biology шығарған қалыпты тұзды ерітінді немесе вирусты сақтайтын түтікшені пайдалану ұсынылады.

жұлдыру тампоны:екі жақты жұтқыншақтың бадамша бездерін және жұтқыншақтың артқы қабырғасын бір рет қолданылатын стерильді сынама алу тампонымен сүртіңіз, жағынды 3 мл сынама алу ерітіндісі бар түтікке батырыңыз, құйрықты тастаңыз және түтік қақпағын қатайтыңыз.

3. Үлгіні сақтау және жеткізу:Сыналатын үлгілерді мүмкіндігінше тезірек сынау керек.Тасымалдау температурасын 2~8℃ деңгейінде ұстау керек. 24 сағат ішінде сынауға болатын үлгілерді 2℃~8℃ температурада сақтауға болады және үлгілерді 24 сағат ішінде сынау мүмкін болмаса, оны одан төмен немесе оған тең деңгейде сақтау керек. -70 ℃ дейін (егер -70 ℃ сақтау шарты болмаса, оны -20 ℃ температурада уақытша сақтауға болады), қайталанбаңыз

мұздату және еріту.

4. Үлгіні дұрыс жинау, сақтау және тасымалдау осы өнімнің өнімділігі үшін маңызды.

【Тестілеу әдісі】

1. Үлгіні өңдеу және үлгіні қосу

1.1 Үлгіні өңдеу

Жоғарыда көрсетілген сынама алу ерітіндісін үлгілермен араластырғаннан кейін ДНҚ шығару реагентінің түтігіне үлгіден 30 мкл алыңыз және оны біркелкі араластырыңыз.

1.2 Жүктеу

20 мкл қалпына келтіру реагентін алыңыз және оны MPV анықтау реагентіне қосыңыз, жоғарыда өңделген үлгіден 5 мкл қосыңыз (оң бақылау және теріс бақылау үлгілермен қатар өңделуі керек), түтік қақпағын жабыңыз, оны 2000 айн/мин 10 центрифугалаңыз. секунд.

2. ПТР күшейту

2.1 Дайындалған ПТР пластинасын/түтіктерді флуоресцентті ПТР құралына салыңыз, әрбір сынақ үшін теріс бақылау және оң бақылау орнатылуы керек.

2.2 Флуоресцентті арна параметрі:

1) MPV анықтау үшін FAM арнасын таңдаңыз;

2) Ішкі бақылау генін анықтау үшін HEX/VIC арнасын таңдаңыз;

3. Нәтижелерді талдау

Негізгі сызықты теріс басқару элементінің флуоресцентті қисығының ең жоғары нүктесінен жоғары орнатыңыз.

4.Сапаны бақылау

4.1 Теріс басқару: FAM、HEX/VIC арнасында Ct мәні анықталмады немесе Ct＞40；

4.2 Оң басқару: FAM, HEX/VIC арнасында, Ct≤40；

4.3 Жоғарыда көрсетілген талаптар бір экспериментте орындалуы керек, әйтпесе сынақ нәтижелері жарамсыз болып табылады және экспериментті қайталау қажет.

【Мәнді кесу】

Үлгі мына жағдайда оң деп саналады: Мақсатты реттілік Ct≤40, Ішкі бақылау гені Ct≤40.

【Нәтижелерді интерпретациялау】

Сапа бақылауынан өткеннен кейін пайдаланушылар HEX/VIC арнасындағы әрбір үлгі үшін күшейту қисығының бар-жоғын тексеруі керек, егер бар болса және Ct≤40 болса, бұл ішкі бақылау генінің сәтті күшейтілгенін және бұл нақты сынақ жарамды екенін көрсетеді.Пайдаланушылар келесі талдауды жалғастыра алады:

3. Ішкі бақылау генін күшейту сәтсіз болған үлгілер үшін (HEX/VIC

арна, Ct＞40 немесе күшейту қисығы жоқ), төмен вирустық жүктеме немесе ПТР ингибиторының болуы сәтсіздікке себеп болуы мүмкін, зерттеу үлгі жинаудан қайталануы керек;

4. Оң сынамалар мен өсірілген вирустар үшін ішкі бақылау нәтижелері әсер етпейді;

Теріс сыналған үлгілер үшін ішкі бақылау оң сыналуы керек, әйтпесе жалпы нәтиже жарамсыз болады және үлгіні жинау қадамынан бастап сараптаманы қайталау қажет.