SARS-CoV-2 ანეიტრალებელი ანტისხეულების გამოვლენის ნაკრები (ELISA)

【განკუთვნილი გამოყენება】

SARS-CoV-2 ანეიტრალებელი ანტისხეულების გამოვლენის ნაკრები არის კონკურენტუნარიანი ფერმენტთან დაკავშირებული იმუნოსორბენტული ანალიზი (ELISA), რომელიც განკუთვნილია SARS-CoV-2-ის ტოტალური განეიტრალებელი ანტისხეულების ხარისხობრივი და ნახევრად რაოდენობრივი გამოვლენისთვის ადამიანის შრატში და პლაზმაში. SARS-CoV-2 ანეიტრალებელი ანტისხეულების გამოვლენის ნაკრები შეიძლება გამოყენებულ იქნას როგორც დამხმარე პირების იდენტიფიცირება SARS-CoV-2-ზე ადაპტური იმუნური პასუხით, რაც მიუთითებს ბოლო ან ადრე ინფექციაზე. SARS-CoV-2 ნეიტრალიზებელი ანტისხეულების გამოვლენის ნაკრები არ უნდა იქნას გამოყენებული მწვავე SARS-CoV-2 ინფექციის დიაგნოსტირებისთვის.

【შესავალი】

კორონავირუსის ინფექციები, როგორც წესი, იწვევს ანტისხეულების ნეიტრალიზებულ პასუხებს. სეროკონვერსიის მაჩვენებლები COVID-19 პაციენტებში არის 50% და 100% სიმპტომების დაწყებიდან მე-7 და მე-14 დღეს, შესაბამისად. ცოდნის გასაცნობად, სისხლში შესაბამისი ვირუსის განეიტრალებელი ანტისხეული აღიარებულია, როგორც ანტისხეულების ეფექტურობის განსაზღვრის სამიზნე და ნეიტრალიზებელი ანტისხეულების უფრო მაღალი კონცენტრაცია მიუთითებს დაცვის უფრო მაღალ ეფექტურობაზე. დაფის შემცირების ნეიტრალიზაციის ტესტი (PRNT) აღიარებულია ოქროს სტანდარტად ნეიტრალიზებული ანტისხეულების გამოსავლენად. თუმცა, დაბალი გამტარუნარიანობისა და ოპერაციისთვის უფრო მაღალი მოთხოვნილების გამო, PRNT არ არის პრაქტიკული ფართომასშტაბიანი სეროდიაგნოსტიკისა და ვაქცინის შეფასებისთვის. SARS-CoV-2 ანეიტრალებელი ანტისხეულების გამოვლენის ნაკრები ეფუძნება კონკურენტულ ფერმენტთან დაკავშირებულ იმუნოსორბენტულ ანალიზს (ELISA) მეთოდოლოგიას, რომელსაც შეუძლია აღმოაჩინოს ნეიტრალიზებელი ანტისხეული სისხლის ნიმუშში, ასევე სპეციალურად წვდომა ამ ტიპის ანტისხეულების კონცენტრაციის დონეებზე.

 【ტესტირების პროცედურა】

1. ცალკეულ მილებში, აკრიფეთ 120 μL მომზადებული hACE2-HRP ხსნარი.

2. თითოეულ მილში დაამატეთ 6 μL კალიბრატორები, უცნობი ნიმუშები, ხარისხის კონტროლი და კარგად აურიეთ.

3. გადაიტანეთ მე-2 საფეხურზე მომზადებული თითოეული ნარევიდან 100 μL შესაბამის მიკროფირფიტის ჭებში წინასწარ შემუშავებული ტესტის კონფიგურაციის მიხედვით.

3. დააფარეთ ფირფიტა Plate Sealer-ით და გააჩერეთ 37°C-ზე 60 წუთის განმავლობაში.

4. ამოიღეთ Plate Sealer და გარეცხეთ ფირფიტა დაახლოებით 300 μL 1× Wash Solution თითო ჭაბურღილში ოთხჯერ.

5. დაკრათ ფირფიტა ქაღალდის პირსახოცზე, რათა ამოიღოთ ნარჩენი სითხე ჭაბურღილების სარეცხი ნაბიჯების შემდეგ.

6. დაამატეთ 100 μL TMB ხსნარი თითოეულ ჭაბურღილში და ჩადეთ ფირფიტა სიბნელეში 20 – 25°C ტემპერატურაზე 20 წუთის განმავლობაში.

7. რეაქციის შესაჩერებლად თითოეულ ჭაბურღილს დაამატეთ 50 μL Stop Solution.

8. წაიკითხეთ შთანთქმა მიკროფირფიტის მკითხველში 450 ნმ-ზე 10 წუთის განმავლობაში (630 ნმ, როგორც აქსესუარი რეკომენდირებულია უმაღლესი სიზუსტის მუშაობისთვის.