SARS-Cov-2 netralisasi Antibone Antibone Kit (Elisa)
【Prinsip】
SARS-Cov-2 netralisasi Antibone Antibody Deteksi Kit adhedhasar metodologi Elisa sing kompetitif.
Nggunakake domain naleni reseptor sing diresiki (rbd), protein saka protein viral veren lan sel inang
Receptor Ace2, tes iki dirancang kanggo niru interaksi netralisasi virus host.
Kalibrator, Kontrol kualitas, lan conto serum utawa plasma kanthi sumur kanthi becik ing ngencerake
Buffer ngemot Hace2-HRP konjugate aliquoted ing tabung cilik. Banjur campuran kasebut ditransfer
sumur mikroplate sing ngemot fragmen RBD rekombinan SARS-Cov-2 immobilisasi Immobilisasi (RBD) kanggo
inkubasi. Sajrone inkubasi 30 menit, antibodi khusus RBD ing kalibrator, QC lan
Sampel bakal bersaing karo Hace2-HRP kanggo naleni khusus RBD sing immobilisasi ing sumur. Sawise
Inkubasi kasebut, sumur kasebut dibuang kaping 4 kanggo mbusak unbound Hace2-HRP konjugate. Solusi saka
TMB banjur ditambahake lan dielipake 20 menit ing suhu kamar, nyebabake pangembangan a
warna biru. Perkembangan warna mandheg kanthi tambahan 1n HCL, lan penyerap yaiku
diukur spektrik ing 450 nm. Intensitas warna sing dibentuk yaiku proporsi karo
Jumlah enzim saiki, lan ora ana gandhengane karo jumlah standar sing padha.
Liwat perbandingan karo kurva kalibrasi sing dibentuk dening calibrator sing diwenehake, konsentrasi saka
Antibodi netralisasi ing conto sing ora dingerteni banjur diitung.
【Bahan sing dibutuhake nanging ora diwenehake】
1. Banyu utawa Deionized
2. Pipette Precision: 10μl, 100μl, 200μr lan 1 ml
3 .. Tipe pipette sing bisa digunakake
4. Readoplan Mikroplate bisa maca penyerap maca 450nm.
5. Nyerep kertas
6. Kertas Grafik
7. Mixer vorteks utawa padha
【Koleksi Spesimen lan Storage】
1. Contoh serum lan plasma sing diklumpukake ing tabung sing ngemot K2-edta bisa digunakake kanggo kit iki.
2. Spesimen kudu dicekel lan bisa disimpen nganti 48 jam ing 2 ° C - 8 ° C - 8 ° C sadurunge njalari.
Spesialisasi sing ditahan kanggo wektu sing luwih suwe (nganti 6 wulan) kudu beku mung sapisan ing -20 ° C sadurunge takon.
Aja ngindhari siklus beku bola-bali.
Protokol
【Persiapan reagen】
1. Kabeh reagen kudu digawa metu saka kulkas lan diijini bali menyang suhu kamar sadurunge digunakake
(20 ° nganti 25 ° C). Simpen kabeh reagen ing kulkas kanthi cepet sawise digunakake.
2. Kabeh conto lan kontrol kudu vortexed sadurunge digunakake.
3. Persiapan Solusi Hace2-HRP: Nglampahi konsentrasi Hace2 HRP ing 1: 51 rasio pencelakan kanthi ngencerake
Buffer. Contone, cairake 100 erlot saka Hace2-HRP musatake karo buffer HRP saka
nggawe solusi Hace2-HRP.
4 .. Persiapan solusi solusi 1: Ngilangake solusi 20 × cuci kanthi banyu deionized utawa sulingan kanthi a
Rasio volume 1:19. Contone, cairake 20 ml saka 20 isan cuci solusi kanthi 380 ml denionisasi utawa
Banyu suling kanggo nggawe solusi cuci 400 ml saka 1 00 mL.
【Prosedur tes】
1. Ing tabung sing kapisah, aliquot 120μl saka solusi Hace2-HRP sing disiapake.
2 .. Tambah 6 μL calibrator, conto sing ora dingerteni, kontrol kualitas ing saben tabung lan dicampur kanthi apik.
3. Transfer 100μl saka saben campuran sing disiapake ing langkah 2 menyang sumur mikroplate sing cocog karo
kanggo konfigurasi tes sing wis preduli.
3 .. Tutup piring kanthi sealjing piring lan incubate ing 37 ° C 30 menit.
4. Copot sealer piring lan cuci piring kanthi udakara 300 μL saka 1 × cuci solusi saben wellfor kaping papat.
5. Tutul piring ing andhuk kertas kanggo nyopot sisa cairan ing sumur sawise ngumbah langkah-langkah.
6 .. Tambah 100 μL saka solusi TMB kanggo saben sumur lan inkubate piring ing peteng ing 20 - 25 ° C sajrone 20 menit.
7 .. Tambah 50 μL saka solusi mandeg kanggo saben bisa mungkasi reaksi kasebut.
8. Waca Penyerapan ing Pembaca Mikroplate ing 450 NM ing 10 menit (630NM minangka aksesoris yaiku
Disaranake kanggo kinerja tliti sing luwih dhuwur).