Kit Deteksi Antibodi Neutralisasi SARS-CoV-2 (ELISA)
【PRINSIP】
Kit Deteksi Antibodi Neutralisasi SARS-CoV-2 adhedhasar metodologi ELISA sing kompetitif.
Nggunakake domain pengikat reseptor sing dimurnèkaké (RBD), protein saka protein spike virus (S) lan sel inang
reseptor ACE2, tes iki dirancang kanggo niru interaksi netralisasi virus-host.
Kalibrator, Kontrol Kualitas, lan conto serum utawa plasma dicampur kanthi apik ing pengenceran
buffer ngemot conjugate hACE2-HRP aliquoted ing tabung cilik. Banjur campuran ditransfer menyang
sumur plat mikro sing ngemot fragmen RBD rekombinan SARS-CoV-2 (RBD) imobilisasi kanggo
inkubasi. Sajrone inkubasi 30 menit, antibodi spesifik RBD ing kalibrator, QC lan
sampel bakal saingan karo hACE2-HRP kanggo naleni spesifik RBD immobilized ing sumur. Sawise
inkubasi, sumur dikumbah kaping 4 kanggo mbusak konjugat hACE2-HRP sing ora kaiket. Solusi saka
TMB banjur ditambahake lan diinkubasi nganti 20 menit ing suhu kamar, nyebabake pangembangan a
werna biru. Pangembangan werna mandheg kanthi tambahan 1N HCl, lan absorbansi kasebut
diukur kanthi spektrofotometri ing 450 nm. Intensitas warna sing dibentuk sebanding karo
jumlah enzim sing ana, lan ana hubungane karo jumlah standar sing diuji kanthi cara sing padha.
Liwat comparison karo kurva kalibrasi kawangun dening calibrators kasedhiya, konsentrasi saka
antibodi neutralizing ing sampel ora dingerteni banjur diwilang.
【MATERI sing dibutuhake nanging ora diwenehake】
1. Banyu suling utawa deionisasi
2. Pipet presisi: 10μL, 100μL, 200μL lan 1 mL
3. Tip pipet sing bisa digunakake
4. Microplate maca bisa maca absorbance ing 450nm.
5. Kertas penyerap
6. Kertas grafik
7. Vortex mixer utawa padha
【SPECIMEN KOLEKSI lan panyimpenan】
1. Sampel serum lan Plasma sing diklumpukake ing tabung sing ngemot K2-EDTA bisa digunakake kanggo kit iki.
2. Spesimen kudu ditutup lan bisa disimpen nganti 48 jam ing suhu 2 °C - 8 °C sadurunge diuji.
Spesimen sing ditahan kanggo wektu sing luwih suwe (nganti 6 sasi) kudu beku mung sapisan ing -20 °C sadurunge tes.
Ngindhari siklus beku-thaw bola-bali.
PROTOKOL
【Preparation Reagen】
1. Kabeh reagen kudu dijupuk metu saka kulkas lan diijini bali menyang suhu kamar sadurunge digunakake
(20° nganti 25°C). Simpen kabeh reagen ing kulkas sakcepete sawise digunakake.
2. Kabeh conto lan kontrol kudu vortexed sadurunge digunakake.
3. Persiapan Solusi hACE2-HRP: Konsentrasi hACE2-HRP diencerake kanthi rasio pengenceran 1: 51 karo Pengenceran
panyangga. Contone, encer 100 μL konsentrat hACE2-HRP karo 5,0mL Buffer Pengenceran HRP nganti
nggawe solusi hACE2-HRP.
4. 1× Cuci Solusi Persiapan: Encer 20× Solusi Cuci nganggo banyu deionisasi utawa suling kanthi
rasio volume 1:19. Contone, encer 20 mL saka 20 × Wash Solution karo 380 mL deionized utawa
banyu suling kanggo nggawe 400 ml saka 1 × Wash Solution.
【Prosedur Tes】
1. Ing tabung kapisah, aliquot 120μL saka Solusi hACE2-HRP sing disiapake.
2. Tambah 6 μL saka calibrators, conto dingerteni, kontrol kualitas ing saben tabung lan nyampur uga.
3. Transfer 100μL saben campuran sing disiapake ing langkah 2 menyang sumur microplate sing cocog miturut
kanggo konfigurasi test sing wis dirancang.
3. Tutup piring nganggo Plate Sealer lan inkubasi ing 37 ° C suwene 30 menit.
4. Copot Plate Sealer lan cuci piring kanthi kira-kira 300 μL 1 × Wash Solution saben sumur kaping papat.
5. Tutul piring ing andhuk kertas kanggo mbusak sisa cairan ing sumur sawise langkah-langkah ngumbah.
6. Tambah 100 μL TMB Solution kanggo saben sumur lan inkubasi piring ing peteng ing 20 - 25 ° C kanggo 20 menit.
7. Tambah 50 μL Stop Solution kanggo saben sumur kanggo mungkasi reaksi.
8. Waca absorbance ing microplate maca ing 450 nm ing 10 menit (630nm minangka aksesoris
dianjurake kanggo kinerja presisi sing luwih dhuwur).