SARS-COV-2中和抗体検出キット（ELISA）
【原理】
SARS-COV-2中和抗体検出キットは、競争力のあるELISA方法論に基づいています。
精製受容体結合ドメイン（RBD）、ウイルススパイク（S）タンパク質からのタンパク質、および宿主細胞を使用する
受容体ACE2、このテストは、ウイルスホスト中和相互作用を模倣するように設計されています。
キャリブレーター、品質コントロール、血清または血漿サンプルは、希釈中に個別によく混合されます
小さなチューブにアリコートされたHACE2-HRPコンジュゲートを含むバッファー。その後、混合物が転送されます
固定化された組換えSARS-COV-2 RBDフラグメント（RBD）を含むマイクロプレートウェル
インキュベーション。 30分間のインキュベーション中、キャリブレーター、QCおよび
サンプルは、ウェルに固定されたRBDを特定の結合のためにHACE2-HRPと競合します。後
インキュベーション、ウェルを4回洗浄して、非結合HACE2-HRPコンジュゲートを除去します。の解決策
次に、TMBを添加し、室温で20分間インキュベートし、
青色。 1N HClの添加により色の発達が停止され、吸光度は
450 nmで分光測光で測定されました。形成される色の強度は
存在する酵素の量であり、同じ方法でアッセイされた標準の量に反比例します。
提供されたキャリブレーターによって形成されたキャリブレーション曲線との比較を通じて、の濃度
その後、未知のサンプルの中和抗体が計算されます。
【材料は必要ですが、提供されていません】
1。蒸留または脱イオン水
2。精密ピペット：10μl、100μl、200μl、1 ml
3。使い捨てのピペットのヒント
4。450nmで吸収性を読むことができるマイクロプレートリーダー。
5。吸収性紙
6。グラフペーパー
7。渦ミキサーまたは同等
【標本の収集と保管】
1。K2-EDTAを含むチューブに収集された血清および血漿サンプルは、このキットに使用できます。
2.標本はキャップされ、アッセイする前に2°C -8°Cで最大48時間保存することができます。
長時間保持されている標本（最大6か月）は、アッセイの前に-20°Cで1回だけ凍結する必要があります。
繰り返しの凍結融解サイクルは避けてください。
プロトコル
【試薬の準備】
1.すべての試薬は冷凍から取り出し、使用する前に室温に戻ることを許可する必要があります
（20°〜25°C）。使用後すぐにすべての試薬を冷蔵庫に保存します。
2.すべてのサンプルとコントロールは、使用する前に渦をつける必要があります。
3。HACE2-HRP溶液の調製：希釈した1：51希釈比で希釈HACE2-HRP濃縮物
バッファ。たとえば、5.0mlのHRP希釈バッファーで100μLのHACE2-HRP濃縮物を希釈します
HACE2-HRPソリューションを作成します。
4。1×洗浄溶液の準備：20×洗浄溶液を脱イオンまたは蒸留水で希釈します
1:19の体積比。たとえば、380 mLの脱イオンまたはまたは
400 mlの1×洗浄溶液を作るための蒸留水。
【テスト手順】
1.別々のチューブでは、調製されたHACE2-HRP溶液のアリコート120μL。
2.各チューブに6μlのキャリブレーター、未知のサンプル、品質コントロールを加え、よく混ぜます。
3.ステップ2で調製した各混合物を対応するマイクロプレートウェルに100μl移動します
事前に設計されたテスト構成に。
3.プレートをプレートシーラーで覆い、37°Cで30分間インキュベートします。
4.プレートシーラーを取り外し、4回あたり約300μlの1×洗浄液でプレートを洗浄します。
5.洗浄した後、井戸の残留液を除去するには、ペーパータオルのプレートをタップします。
6.各ウェルに100μLのTMB溶液を加え、20〜25°Cで20〜25°Cでプレートを暗闇の中でインキュベートします。
7.各ウェルに50μlの停止溶液を追加して、反応を止めます。
8。10分以内に450 nmでマイクロプレートリーダーの吸光度を読む（アクセサリがあるので630nm
より高い精度のパフォーマンスに推奨されます）。