SARS-CoV-2中和抗体検出キット（ELISA）

【使用目的】

SARS-CoV-2 中和抗体検出キットは、ヒト血清および血漿中の SARS-CoV-2 に対する全中和抗体の定性的および半定量的検出を目的とした競合酵素結合免疫吸着測定法 (ELISA) です。 SARS-CoV-2 中和抗体検出キットは、SARS-CoV-2 に対する適応免疫反応を示し、最近または過去に感染したことを示す個人を特定する際の補助として使用できます。 SARS-CoV-2 中和抗体検出キットは、急性 SARS-CoV-2 感染症の診断には使用しないでください。

【導入】

コロナウイルス感染症は通常、中和抗体反応を誘発します。新型コロナウイルス感染症患者の血清変換率は、症状発現後 7 日目と 14 日目でそれぞれ 50% と 100% です。現在の知識では、血中の対応するウイルス中和抗体は抗体の有効性を決定するための標的として認識されており、中和抗体の濃度が高いほど防御有効性が高いことを示します。プラーク減少中和テスト (PRNT) は、中和抗体を検出するためのゴールドスタンダードとして認識されています。ただし、PRNT はスループットが低く、操作要件が高いため、大規模な血清診断やワクチン評価には実用的ではありません。 SARS-CoV-2 中和抗体検出キットは、競合酵素結合免疫吸着測定法 (ELISA) 法に基づいており、血液サンプル中の中和抗体を検出できるだけでなく、このタイプの抗体の濃度レベルに特別にアクセスできます。

 【試験手順】

1. 調製した hACE2-HRP 溶液 120μL を別のチューブに分取します。

2. 各チューブに 6 μL のキャリブレーター、未知のサンプル、品質管理を加え、よく混合します。

3. 事前に設計されたテスト構成に従って、ステップ 2 で調製した各混合物 100 μL を対応するマイクロプレートのウェルに移します。

3.プレートシーラーでプレートを覆い、37℃で60分間インキュベートします。

4. プレートシーラーを取り外し、ウェルあたり約 300 μL の 1× 洗浄溶液でプレートを 4 回洗浄します。

5. 洗浄ステップ後にプレートをペーパータオル上で軽くたたき、ウェル内の残留液体を除去します。

6. 100 μL の TMB 溶液を各ウェルに加え、プレートを暗所、20 ～ 25°C で 20 分間インキュベートします。

7.各ウェルに Stop Solution 50 μL を加えて反応を停止します。

8. マイクロプレートリーダーで 450 nm で 10 分以内に吸光度を読み取ります (より高い精度のパフォーマンスを得るには、付属品として 630 nm を推奨します)。