ערכת גילוי נוגדנים מנטרלים SARS-CoV-2 (ELISA)

【שימוש מיועד】

ערכת גילוי נוגדנים מנטרלים ל-SARS-CoV-2 היא בדיקת מתחרים חימוניים מקושר אנזים (ELISA) המיועדת לזיהוי איכותי וכמותי למחצה של נוגדנים מנטרלים הכוללים ל-SARS-CoV-2 בסרום ובפלזמה של בני אדם. ערכת SARS-CoV-2 לגילוי נוגדנים מנטרלים יכולה לשמש ככלי עזר בזיהוי אנשים עם תגובה חיסונית אדפטיבית ל-SARS-CoV-2, המעידה על זיהום אחרון או קודם. אין להשתמש בערכת SARS-CoV-2 לנטרל נוגדנים לאבחון זיהום חריף של SARS-CoV-2.

【מָבוֹא】

זיהומים בקורונה מעוררים בדרך כלל תגובות נוגדנים מנטרלות. שיעורי ההמרה הסרוקית בחולי COVID-19 הם 50% ו-100% ביום 7 ו-14 לאחר הופעת התסמינים, בהתאמה. כדי להציג ידע, נוגדן מנטרל וירוסים תואם בדם מוכר כיעד לקביעת יעילות נוגדנים וריכוז גבוה יותר של הנוגדן המנטרל מצביע על יעילות הגנה גבוהה יותר. מבחן נטרול הפחתת פלאק (PRNT) הוכר כסטנדרט הזהב לאיתור נוגדנים מנטרלים. עם זאת, בשל התפוקה הנמוכה והדרישה הגבוהה יותר לפעולה, PRNT אינו מעשי עבור סרודיאגנוזיס והערכת חיסונים בקנה מידה גדול. ערכת זיהוי הנוגדנים המנטרלים של SARS-CoV-2 מבוססת על מתודולוגיה תחרותית (ELISA), אשר יכולה לזהות את הנוגדן המנטרל בדגימת הדם וכן לגשת במיוחד לרמות הריכוז של נוגדנים מסוג זה.

 【נוהל בדיקה】

1. בצינורות נפרדים, מנה 120μL מתמיסת hACE2-HRP המוכנה.

2. הוסף 6 μL של מכיילים, דגימות לא ידועות, בקרות איכות בכל צינור וערבב היטב.

3.העבר 100μL מכל תערובת שהוכנה בשלב 2 לתוך בארות המיקרו-פלט המתאימות לפי תצורת הבדיקה שתוכננה מראש.

3. כסו את הצלחת עם אוטם צלחות ודגרו ב-37 מעלות צלזיוס למשך 60 דקות.

4. הסר את אוטם הצלחות ושטוף את הצלחת עם כ-300 μL של תמיסת כביסה 1× לכל באר במשך ארבע פעמים.

5. הקש על הצלחת על מגבת נייר כדי להסיר שאריות נוזל בבארות לאחר שלבי הכביסה.

6. הוסף 100 μL של תמיסת TMB לכל באר ודגרו את הצלחת בחושך ב-20 - 25 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות.

7. הוסף 50 μL של תמיסת עצור לכל באר כדי לעצור את התגובה.

8. קרא את הספיגה בקורא microplate ב-450 ננומטר תוך 10 דקות (מומלץ 630 ננומטר כאביזר לביצועים מדויקים יותר.