ערכת זיהוי חומצות גרעין של Monkeypox Virus (MPV).

הערכה מכילה ריאגנטים לעיבוד 48 בדיקות או בקרת איכות, כולל הרכיבים הבאים:

מגיב א

מֵגִיבB

הערה: לא ניתן להשתמש ברכיבים של מספרי אצווה שונים זה בזה

【תנאי אחסון וחיי מדף】

1. Reagent A/B ניתן לאחסן ב-2-30°C, וחיי המדף הם 10 חודשים.

2. אנא פתח את מכסה המבחנה רק כאשר אתה מוכן לבדיקה.

3. אין להשתמש במבחנות מעבר לתאריך התפוגה.

4. אין להשתמש בצינור איתור דליפה.

【מכשיר ישים】

מתאים ל- מתאים למערכת ניתוח PCR LC480, מערכת ניתוח PCR אוטומטית Gentier 48E, מערכת ניתוח PCR ABI7500.

【דרישות לדוגמא】

1. סוגי מדגם ישימים: דגימות משטחי גרון.

2. פתרון דגימה:לאחר אימות, מומלץ להשתמש בשפופרת רגילה של מי מלח או שימור וירוסים המיוצרים על ידי Hangzhou Testsea biology לאיסוף דגימות.

משטח גרון:נגב את שקדי הלוע הדו-צדדיים ואת דופן הלוע האחורי עם ספוגית דגימה סטרילית חד-פעמית, טבלו את הספוגית בצינור המכילה תמיסת דגימה של 3 מ"ל, השליך את הזנב והדק את מכסה הצינור.

3. אחסון ומשלוח לדוגמה:יש לבדוק את הדגימות שייבדקו בהקדם האפשרי.יש לשמור על טמפרטורת ההובלה ב-2~8℃. ניתן לאחסן את הדגימות שניתן לבדוק תוך 24 שעות בטמפרטורה של 2℃~8℃ ואם לא ניתן לבדוק את הדגימות תוך 24 שעות, יש לאחסן אותן בפחות או שווה ערך. עד -70 ℃ (אם אין מצב אחסון של -70 ℃, ניתן לאחסן אותו ב-20 ℃ באופן זמני), הימנע מחזרות

הקפאה והפשרה.

4. איסוף דגימות נאות, אחסון ושינוע הם קריטיים לביצועים של מוצר זה.

【שיטת בדיקה】

1. עיבוד מדגם והוספת מדגם

1.1 עיבוד לדוגמה

לאחר ערבוב תמיסת הדגימה לעיל עם דגימות, קח 30μL מהדגימה לתוך צינור המגיב לשחרור ה-DNA וערבב אותו באופן שווה.

1.2 טעינה

קח 20μL של מגיב השחזור והוסף אותו למגיב זיהוי MPV, הוסף 5μL מהדגימה המעובדת לעיל (הבקרה החיובית והבקרה השלילית יעובדו במקביל לדגימות), כסו את מכסה הצינור, צנטריפוגה אותו ב-2000 סל"ד למשך 10 שניות.

2. הגברה של PCR

2.1 טען את צלחת/צינורות ה-PCR המוכנים למכשיר ה-PCR הקרינה, בקרה שלילית ובקרה חיובית יוגדרו עבור כל בדיקה.

2.2 הגדרת ערוץ פלורסנט:

1) בחר ערוץ FAM לזיהוי MPV;

2) בחר ערוץ HEX/VIC לזיהוי גנים בקרה פנימית;

3. ניתוח תוצאות

הגדר את קו הבסיס מעל הנקודה הגבוהה ביותר של עקומת הפלורסנט של הבקרה השלילית.

4. בקרת איכות

4.1 בקרה שלילית: לא זוהה ערך Ct בערוץ FAM、HEX/VIC, או Ct＞40；

4.2 בקרה חיובית: בערוץ FAM、HEX/VIC, Ct≤40；

4.3 יש לעמוד בדרישות הנ"ל באותו ניסוי, אחרת תוצאות הבדיקה אינן חוקיות ויש לחזור על הניסוי.

【ערך חתוך】

דגימה נחשבת כחיובית כאשר: רצף היעד Ct≤40, גן הבקרה הפנימי Ct≤40.

【פרשנות התוצאות】

לאחר העברת בקרת האיכות, על המשתמשים לבדוק אם יש עקומת הגברה לכל דגימה בערוץ HEX/VIC, אם יש ועם Ct≤40, זה הצביע על כך שגן הבקרה הפנימי מוגבר בהצלחה והבדיקה הספציפית הזו תקפה.משתמשים יכולים להמשיך לניתוח ההמשך:

3. עבור דגימות עם הגברה של גן הבקרה הפנימי נכשל (HEX/VIC

ערוץ, Ct＞40, או ללא עקומת הגברה), עומס נגיפי נמוך או קיומו של מעכב PCR יכולים להיות הסיבה לכישלון, יש לחזור על הבדיקה מאוסף הדגימות;

4. עבור דגימות חיוביות ווירוס מתורבת, תוצאות הבקרה הפנימית אינן משפיעות;

עבור דגימות שנבדקו שליליות, הבקרה הפנימית צריכה להיבדק חיובית אחרת התוצאה הכוללת אינה חוקית ויש לחזור על הבדיקה, החל משלב איסוף הדגימה