Kit di rilevamento di anticorpi neutralizzanti SARS-CoV-2 (ELISA)

【USO PREVISTO】

Il kit di rilevamento degli anticorpi neutralizzanti SARS-CoV-2 è un test immunoassorbente legato a un enzima (ELISA) competitivo destinato al rilevamento qualitativo e semiquantitativo degli anticorpi neutralizzanti totali contro SARS-CoV-2 nel siero e nel plasma umani. Il kit di rilevamento degli anticorpi neutralizzanti SARS-CoV-2 può essere utilizzato come ausilio nell’identificazione di soggetti con una risposta immunitaria adattativa al SARS-CoV-2, indicando un’infezione recente o precedente. Il kit di rilevamento degli anticorpi neutralizzanti SARS-CoV-2 non deve essere utilizzato per diagnosticare un’infezione acuta da SARS-CoV-2.

【INTRODUZIONE】

Le infezioni da coronavirus in genere inducono risposte anticorpali neutralizzanti. I tassi di sieroconversione nei pazienti COVID-19 sono del 50% e del 100% rispettivamente nei giorni 7 e 14 dopo l’insorgenza dei sintomi. Allo stato attuale delle conoscenze, il corrispondente anticorpo neutralizzante il virus nel sangue è riconosciuto come bersaglio per determinare l'efficacia dell'anticorpo e una maggiore concentrazione dell'anticorpo neutralizzante indica una maggiore efficacia protettiva. Il test di neutralizzazione della riduzione della placca (PRNT) è stato riconosciuto come il gold standard per la rilevazione degli anticorpi neutralizzanti. Tuttavia, a causa della sua bassa produttività e dei maggiori requisiti operativi, il PRNT non è pratico per la sierodiagnosi su larga scala e la valutazione dei vaccini. Il kit di rilevamento degli anticorpi neutralizzanti SARS-CoV-2 si basa sulla metodologia ELISA (Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), che è in grado di rilevare l'anticorpo neutralizzante nel campione di sangue e di accedere in modo specifico ai livelli di concentrazione di questo tipo di anticorpo.

 【Procedura di prova】

1.In provette separate, aliquotare 120μL della soluzione hACE2-HRP preparata.

2.Aggiungere 6 μL di calibratori, campioni sconosciuti e controlli di qualità in ciascuna provetta e mescolare bene.

3.Trasferire 100μL di ciascuna miscela preparata nella fase 2 nei corrispondenti pozzetti della micropiastra secondo la configurazione di test predefinita.

3.Coprire la piastra con il sigillante per piastre e incubare a 37°C per 60 minuti.

4.Rimuovere il sigillante per piastra e lavare la piastra con circa 300 μL di soluzione di lavaggio 1× per pozzetto per quattro volte.

5.Battere la piastra su un tovagliolo di carta per rimuovere il liquido residuo nei pozzetti dopo le fasi di lavaggio.

6.Aggiungere 100 μL di soluzione TMB a ciascun pozzetto e incubare la piastra al buio a 20 – 25°C per 20 minuti.

7.Aggiungere 50 μl di soluzione bloccante a ciascun pozzetto per arrestare la reazione.

8.Leggere l'assorbanza nel lettore per micropiastre a 450 nm entro 10 minuti (si consiglia 630 nm come accessorio per prestazioni di precisione più elevate.