SARS-CoV-2 hlutleysandi mótefnagreiningarbúnaður (ELISA)
【Meginregla】
SARS-CoV-2 hlutleysandi mótefnagreiningarbúnaðinn er byggður á samkeppnishæfri ELISA aðferðafræði.
Notkun hreinsaðs viðtaka bindandi léns (RBD), prótein úr veiruhópnum (s) próteini og hýsilfruman
Viðtaka ACE2, þetta próf er hannað til að líkja eftir hlutleysandi samspili vírusa-hýsingarinnar.
Kvarða, gæðaeftirlit og sermi eða plasmasýni eru blandaðar vel í þynningu
Buffer sem inniheldur HACE2-HRP samtengt í litlum rörum. Þá eru blöndurnar fluttar inn
Örplötuholurnar sem innihalda hreyfanlegt raðbrigða SARS-CoV-2 RBD brot (RBD) fyrir
Ræktun. Meðan á 30 mínútna ræktun stóð
Sýnishorn munu keppa við HACE2-HRP um sérstaka bindingu RBD hreyfanlegra í holunum. Eftir
Ræktunin, holurnar eru þvegnar 4 sinnum til að fjarlægja óbundna HACE2-HRP samtengingu. Lausn af
TMB er síðan bætt við og ræktað í 20 mínútur við stofuhita, sem leiðir til þróunar a
blár litur. Litþróunin er stöðvuð með því að bæta við 1n HCl og frásogið er
mæld litrófsgreiningar á 450 nm. Styrkleiki litarins sem myndast er í réttu hlutfalli við
Fjárhæð ensíms til staðar og er öfugt tengt fjárhæð staðla sem greint er frá á sama hátt.
Með samanburði við kvörðunarferilinn sem myndast af meðfylgjandi kvarða, styrkur
Hlutleysandi mótefni í hinu óþekkta sýnishorni er síðan reiknað.
【Efni sem krafist er en ekki veitt】
1. eimað eða afjónað vatn
2. Nákvæmar pípettur: 10 mμl, 100μl, 200 μl og 1 ml
3. Einnota ráðleggingar um pípettu
4. örplata lesandi sem getur lesið frásog við 450nm.
5. Gleypinn pappír
6. Graf pappír
7. Vortex blöndunartæki eða samsvarandi
【Sýnishorn og geymsla】
1.. Sermi og plasmasýni sem safnað er í rör sem innihalda K2-EDTA er hægt að nota fyrir þetta sett.
2.
Sýnishorn sem haldin er í lengri tíma (allt að 6 mánuði) ætti að frysta aðeins einu sinni við -20 ° C fyrir próf.
Forðastu endurteknar frysti-þíðingarlotur.
Bókun
【Undirbúningur hvarfefna】
1.
(20 ° til 25 ° C). Vistaðu öll hvarfefni í ísskáp strax eftir notkun.
2.
3.
Buffer. Til dæmis þynntu 100 μl af HACE2-HRP þykkni með 5,0 ml af HRP þynningarbuffi til
Gerðu HACE2-HRP lausn.
4. 1 × WASH lausn undirbúningur: þynntu 20 × Wash lausnina með afjónuðu eða eimuðu vatni með a
rúmmálshlutfall 1:19. Til dæmis þynntu 20 ml af 20 × WASH lausn með 380 ml af afjónuðu eða
Eimað vatn til að búa til 400 ml af 1 × WASH lausn.
【Prófunaraðferð】
1. Í aðskildum rörum, 120 mμl í tilbúinni HACE2-HRP lausn.
2. Bætið við 6 μl af kvarða, óþekktum sýnum, gæðaeftirliti í hverju rör og blandið vel saman.
3. Flytja 100 mL af hverri blöndu sem framleidd er í skrefi 2 í samsvarandi örplötuholur samkvæmt
til fyrirframhönnuð prófunarstillingar.
3. Hyljið plötuna með plötuþéttiefni og ræktið við 37 ° C í 30 mínútur.
4. Fjarlægðu plötuþéttinguna og þvoðu plötuna með um það bil 300 μl af 1 × WASH lausn á hverri vel fyrir vel.
5. Bankaðu á plötuna á pappírshandklæði til að fjarlægja leifarvökva í holunum eftir þvottaskref.
6. Bætið 100 μl af TMB lausn við hverja holu og ræktið plötuna í myrkri við 20 - 25 ° C í 20 mínútur.
7. Bætið 50 μl af stöðvunarlausn við hverja holu til að stöðva viðbrögðin.
8. Lestu frásog í örplötulesara við 450 nm innan 10 mínútna (630nm sem aukabúnaður er
Mælt með fyrir meiri nákvæmni árangur).