SARS-CoV-2 hlutleysandi mótefnagreiningarsett (ELISA)
【ÆTLAÐ NOTKUN】
SARS-CoV-2 hlutleysandi mótefnagreiningarsett er samkeppnishæft ensímtengd ónæmissogandi prófun (ELISA) sem ætlað er til eigindlegrar og hálfmagnsgreiningar á heildarhlutleysandi mótefnum gegn SARS-CoV-2 í sermi og plasma manna. SARS-CoV-2 hlutleysandi mótefnagreiningarsettið er hægt að nota sem hjálp við að bera kennsl á einstaklinga með aðlagandi ónæmissvörun við SARS-CoV-2, sem gefur til kynna nýlega eða fyrri sýkingu. SARS-CoV-2 hlutleysandi mótefnagreiningarsett ætti ekki að nota til að greina bráða SARS-CoV-2 sýkingu.
【INNGANGUR】
Kórónasýkingar valda venjulega hlutleysandi mótefnaviðbrögðum. Seroconversionhlutfall hjá COVID-19 sjúklingum er 50% og 100% á 7. og 14. degi eftir að einkenni koma fram, í sömu röð. Til að kynna þekkingu, er samsvarandi veiruhlutleysandi mótefni í blóði viðurkennt sem markmið til að ákvarða virkni mótefna og hærri styrkur hlutleysandi mótefnis gefur til kynna meiri verndarvirkni. Plaque Reduction Neutralization Test (PRNT) hefur verið viðurkennt sem gullstaðallinn til að greina hlutleysandi mótefni. Hins vegar, vegna lítillar afkösts og meiri kröfu um rekstur, er PRNT ekki hagkvæmt fyrir sermisgreiningu í stórum stíl og mat á bóluefnum. SARS-CoV-2 hlutleysandi mótefnisgreiningarsett er byggt á samkeppnisbundnu ensímtengdu ónæmissogsprófi (ELISA) aðferðafræði, sem getur greint hlutleysandi mótefni í blóðsýni auk þess að fá sérstakt aðgang að styrkleika þessarar tegundar mótefna.
【Prófunaraðferð】
1. Í aðskildum glösum, deilið 120μL af tilbúinni hACE2-HRP lausn.
2.Bætið 6 μL af kvörðunartækjum, óþekktum sýnum, gæðaeftirliti í hverja túpu og blandið vel saman.
3.Flyttu 100μL af hverri blöndu sem útbúin var í skrefi 2 í samsvarandi örplötuhola í samræmi við fyrirfram hannaða prófunaruppsetningu.
3. Hyljið plötuna með Plate Sealer og ræktið við 37°C í 60 mínútur.
4.Fjarlægðu plötuþéttinguna og þvoðu plötuna með um það bil 300 μL af 1× þvottalausn í hverri brunn í fjórum sinnum.
5. Bankaðu á plötuna á pappírshandklæði til að fjarlægja leifar af vökva í brunnunum eftir þvottaskref.
6.Bætið 100 μL af TMB lausn í hvern brunn og ræktið plötuna í myrkri við 20 – 25°C í 20 mínútur.
7.Bætið 50 μL af stöðvunarlausn í hvern brunn til að stöðva hvarfið.
8.Lestu gleypni í örplötulesara við 450 nm innan 10 mínútna (mælt er með 630 nm sem aukabúnað fyrir meiri nákvæmni.
