SARS-CoV-2 չեզոքացնող հակամարմինների հայտնաբերման հավաքածու (ELISA)
【ՆԱԽԱՏԵՍՎԱԾ ՕԳՏԱԳՈՐԾՈՒՄ】
SARS-CoV-2 չեզոքացնող հակամարմինների հայտնաբերման հավաքածուն մրցակցային ֆերմենտների հետ կապված իմունոսորբենտային փորձարկում է (ELISA), որը նախատեսված է մարդու շիճուկում և պլազմայում SARS-CoV-2-ի ընդհանուր չեզոքացնող հակամարմինների որակական և կիսաքանակական հայտնաբերման համար: SARS-CoV-2 չեզոքացնող հակամարմինների հայտնաբերման հավաքածուն կարող է օգտագործվել որպես օգնություն SARS-CoV-2-ին հարմարվողական իմունային պատասխան ունեցող անձանց նույնականացնելու համար, ինչը ցույց է տալիս վերջին կամ նախորդ վարակը: SARS-CoV-2 չեզոքացնող հակամարմինների հայտնաբերման հավաքածուն չպետք է օգտագործվի սուր SARS-CoV-2 վարակի ախտորոշման համար:
【ՆԵՐԱԾՈՒԹՅՈՒՆ】
Կորոնավիրուսային վարակները սովորաբար առաջացնում են չեզոքացնող հակամարմինների պատասխաններ: COVID-19-ով հիվանդների մոտ շիճափոխության մակարդակը 50% և 100% է ախտանիշի ի հայտ գալուց հետո 7-րդ և 14-րդ օրը, համապատասխանաբար: Գիտելիքները ներկայացնելու համար, արյան մեջ համապատասխան վիրուսը չեզոքացնող հակամարմինը ճանաչվում է որպես հակամարմինների արդյունավետությունը որոշելու թիրախ, իսկ չեզոքացնող հակամարմինների ավելի բարձր կոնցենտրացիան ցույց է տալիս ավելի բարձր պաշտպանության արդյունավետությունը: Պլակի նվազեցման չեզոքացման թեստը (PRNT) ճանաչվել է որպես չեզոքացնող հակամարմինների հայտնաբերման ոսկե ստանդարտ: Այնուամենայնիվ, իր ցածր թողունակության և շահագործման համար ավելի բարձր պահանջների պատճառով PRNT-ը գործնական չէ լայնածավալ սերոախտորոշման և պատվաստանյութերի գնահատման համար: SARS-CoV-2 չեզոքացնող հակամարմինների հայտնաբերման հավաքածուն հիմնված է մրցակցային ֆերմենտային իմունոսորբենտային հետազոտության (ELISA) մեթոդաբանության վրա, որը կարող է հայտնաբերել չեզոքացնող հակամարմինը արյան նմուշում, ինչպես նաև հատուկ մուտք գործել այս տեսակի հակամարմինների կոնցենտրացիայի մակարդակը:
【Փորձարկման ընթացակարգ】
1. Առանձին խողովակների մեջ 120 μL պատրաստի hACE2-HRP լուծույթը:
2. Յուրաքանչյուր խողովակի մեջ ավելացրեք 6 մկլ չափաբերիչներ, անհայտ նմուշներ, որակի հսկողություն և լավ խառնեք:
3. 2-րդ քայլում պատրաստված յուրաքանչյուր խառնուրդից 100 մկլ տեղափոխեք համապատասխան միկրոափսե հորեր՝ ըստ նախապես նախագծված փորձարկման կոնֆիգուրացիայի:
3. Թիթեղը ծածկել Plate Sealer-ով և ինկուբացնել 37°C ջերմաստիճանում 60 րոպե:
4. Հեռացրեք ափսեի փակիչը և լվացեք ափսեը մոտ 300 մկլ 1× Լվացքի լուծույթով չորս անգամ:
5. Հպեք ափսեը թղթե սրբիչի վրա՝ լվանալու քայլերից հետո հորերի մնացորդային հեղուկը հեռացնելու համար:
6. Յուրաքանչյուր ջրհորի մեջ ավելացրեք 100 մկլ TMB լուծույթ և 20 րոպե ինկուբացրեք ափսեը մթության մեջ 20 – 25°C ջերմաստիճանում:
7. Յուրաքանչյուր հորին ավելացրեք 50 մկլ կանգառի լուծույթ՝ ռեակցիան դադարեցնելու համար:
8. Կարդացեք ներծծումը միկրոափսեի ընթերցիչում 450 նմ 10 րոպեի ընթացքում (630 նմ, որպես լրասարք, խորհուրդ է տրվում ավելի բարձր ճշգրտության կատարման համար:
