SARS-COV-2 semlegesítő antitest detektáló készlet (ELISA)
【ALAPELV】
A SARS-COV-2 semlegesítő antitest detektáló készlet versenyképes ELISA módszertanon alapul.
Tisztított receptor -kötő domén (RBD), a vírusos tüske (S) fehérje és a gazdasejt fehérje felhasználásával
Receptor ACE2, ezt a tesztet úgy tervezték, hogy utánozza a vírus-host semlegesítő interakciót.
A kalibrátorok, a minőség -ellenőrzések és a szérum vagy a plazmaminták hígításban külön -külön keverednek.
A HACE2-HRP konjugátumot tartalmazó puffer, kis csövekben. Akkor a keverékek átkerülnek
Az immobilizált rekombináns SARS-COV-2 RBD fragmentumot (RBD) tartalmazó mikrotáblatú kutak
inkubálás. A 30 perces inkubálás során az RBD-specifikus antitest a kalibrátorokban, a QC-ben és
A minták versenyeznek a HACE2-HRP-vel a kútokban immobilizált RBD specifikus kötéséért. Után
Az inkubálást, a kutakat négyszer mossuk, hogy eltávolítsák a kötetlen HACE2-HRP konjugátumot. Megoldás
Ezután a TMB -t hozzáadjuk és 20 percig inkubáltuk szobahőmérsékleten, ami a kialakulását eredményezi
kék szín. A színfejlesztést 1N HCL hozzáadásával leállítják, és az abszorbancia az
spektrofotometriailag mért 450 nm -en. A képződött szín intenzitása arányos a
A jelenlévő enzim mennyisége, és fordítva kapcsolódik az azonos módon vizsgált szabványok mennyiségéhez.
Összehasonlítva a megadott kalibrátorok által kialakított kalibrációs görbével, a koncentrációval
Ezután kiszámítják az ismeretlen mintában az antitestek semlegesítő antitesteit.
【A szükséges, de nem biztosított anyagok】
1. desztillált vagy ionmentesített víz
2. Precíziós pipetták: 10 μl, 100 μl, 200 μl és 1 ml
3. Eldobható pipetta tippek
4. Mikroplációs olvasó, amely képes az abszorbanciát 450 nm -en olvasni.
5. abszorbens papír
6. grafikonpapír
7. örvénykeverő vagy azzal egyenértékű
【Minta gyűjtése és tárolása】
1. A K2-EDTA-t tartalmazó csövekben összegyűjtött szérum- és plazmaminták felhasználhatók erre a készletre.
2.
A hosszabb ideig (legfeljebb 6 hónapig) tartott mintákat a vizsgálat előtt csak egyszer kell -20 ° C -on fagyasztani.
Kerülje az ismételt fagyasztási-olvadási ciklusokat.
JEGYZŐKÖNYV
【Reagens előkészítés】
1.
(20 ° - 25 ° C). Használat után haladéktalanul mentse el az összes reagens hűtőszekrényét.
2. Az összes mintát és a vezérlőt használat előtt kell vortexelni.
3. HACE2-HRP oldat előkészítése: Hígítsuk a HACE2-HRP koncentrátumot 1: 51 hígítási aránynál hígítással
Puffer. Például, hígítsuk el a 100 μl HACE2-HRP koncentrátumot 5,0 ml HRP hígító pufferrel
Készítsen HACE2-HRP megoldást.
4. 1 × mosási oldat előkészítése: Hígítsuk meg a 20x -os mosóoldatot ionizált vagy desztillált vízzel a
A térfogatarány 1:19. Például hígítsuk 20 ml 20x mosóoldatot 380 ml ionmentesített vagy
Desztillált víz 400 ml 1x mosóoldat előállításához.
【Vizsgálati eljárás】
1. különálló csövekben, az előkészített HACE2-HRP oldat aliquot 120 μl.
2. Adjon hozzá 6 μl kalibrátorokat, ismeretlen mintákat, minőségi ellenőrzést az egyes csövekbe, és alaposan keverje össze.
3. A 2. lépésben előállított minden keverék 100 μl -t továbbítson a megfelelő mikrotábla kutakba
az előrejelzett tesztkonfigurációhoz.
3. Fedje le a lemezt a lemez tömítővel, és inkubálja 37 ° C -on 30 percig.
4. Távolítsa el a lemez tömítőjét, és mossa meg a lemezt kb. 300 μl 1x mosóoldattal, négyszer.
5. Érintse meg a tányért a papírtörülközőn, hogy a maradék folyadékot a kútokban távolítsa el a lépések mosása után.
6. Adjon hozzá 100 μl TMB -oldatot mindegyik kúthoz, és inkubálja a lemezt sötétben 20-25 ° C -on 20 percig.
7. Adjon hozzá 50 μl stop -oldatot mindegyik lyukhoz a reakció leállításához.
8.
a magasabb pontosságú teljesítményhez ajánlott).