SARS-CoV-2 semlegesítő antitest-észlelő készlet (ELISA)
【RENDELTETÉSSZERŰ HASZNÁLAT】
A SARS-CoV-2 neutralizáló antitest-detektáló készlet egy kompetitív enzimhez kötött immunszorbens vizsgálat (ELISA), amely a SARS-CoV-2 elleni teljes neutralizáló antitestek kvalitatív és szemikvantitatív kimutatására szolgál emberi szérumban és plazmában. A SARS-CoV-2 neutralizáló antitest-észlelő készlet segédeszközként használható a SARS-CoV-2 elleni adaptív immunválaszt mutató egyének azonosításában, jelezve a közelmúltbeli vagy korábbi fertőzést. A SARS-CoV-2 semlegesítő antitest-észlelő készlet nem használható akut SARS-CoV-2 fertőzés diagnosztizálására.
【BEVEZETÉS】
A koronavírus fertőzések jellemzően semlegesítő antitestválaszokat indukálnak. A COVID-19-betegek szerokonverziós aránya 50%, illetve 100% a tünetek megjelenését követő 7., illetve 14. napon. Jelenlegi ismereteink szerint a megfelelő vírussemlegesítő antitest a vérben elismert célpont az antitest hatékonyságának meghatározásához, és a semlegesítő antitest magasabb koncentrációja magasabb védelmi hatékonyságot jelez. A plakkcsökkentési semlegesítési tesztet (PRNT) a neutralizáló antitestek kimutatásának aranystandardjaként ismerik el. Alacsony áteresztőképessége és magasabb működési igénye miatt azonban a PRNT nem alkalmas nagyszabású szerodiagnosztikára és vakcinaértékelésre. A SARS-CoV-2 Semlegesítő Antitest Detection Kit a Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) módszertanon alapul, amely képes kimutatni a semlegesítő antitestet a vérmintában, valamint speciálisan hozzáférni az ilyen típusú antitestek koncentrációszintjéhez.
【Tesztelési eljárás】
1. Külön kémcsövekben aliquot 120 μl-t az elkészített hACE2-HRP oldatból.
2. Adjon hozzá 6 μL kalibrátort, ismeretlen mintákat, minőségellenőrzést minden csőbe, és jól keverje össze.
3. Töltsön át 100 μL-t a 2. lépésben elkészített keverékekből a megfelelő mikrolemez-lyukakba az előre megtervezett tesztkonfiguráció szerint.
3. Fedje le a lemezt Plate Sealer-rel, és inkubálja 37 °C-on 60 percig.
4. Távolítsa el a lemezzárót, és mossa le a lemezt körülbelül 300 μL 1×-es mosóoldattal lyukanként négyszer.
5. A mosási lépések után koppintson a lemezre a papírtörlőre, hogy eltávolítsa a visszamaradó folyadékot a mélyedésekből.
6. Adjon 100 μL TMB oldatot minden lyukba, és inkubálja a lemezt sötétben 20-25°C-on 20 percig.
7. Adjon 50 μL leállító oldatot minden mérőhelyhez a reakció leállításához.
8. Olvassa le az abszorbanciát a mikrolemez-leolvasóban 450 nm-en 10 percen belül (630 nm, mint tartozék ajánlott a nagyobb pontosságú teljesítmény érdekében).
