Twous deteksyon antikò ki netralize SARS-CoV-2 (ELISA)
【PRENSIP】
Twous deteksyon antikò ki netralize SARS-CoV-2 baze sou metodoloji ELISA konpetitif.
Sèvi ak pirifye domèn obligatwa reseptè (RBD), pwoteyin ki soti nan pwoteyin Spike viral (S) ak selil lame a
reseptè ACE2, tès sa a fèt pou imite entèraksyon netralize viris-lame a.
Kalibratè, Kontwòl Kalite, ak echantiyon serom oswa plasma yo melanje endividyèlman byen nan dilution
tanpon ki gen konjige hACE2-HRP aliquoted nan ti tib.Lè sa a, melanj yo transfere nan
pwi mikwoplak yo ki gen fragman RBD SARS-CoV-2 recombinant imobilize (RBD) pou
enkubasyon.Pandan enkubasyon 30 minit, antikò espesifik RBD nan kalibratè yo, QC ak
echantiyon yo pral fè konpetisyon ak hACE2-HRP a pou espesifik obligatwa RBD a imobilize nan pwi yo.Apre
enkubasyon an, yo lave pwi yo 4 fwa pou retire konjige hACE2-HRP ki pa lye.Yon solisyon nan
Lè sa a, TMB ajoute ak enkube pou 20 minit nan tanperati chanm, sa ki lakòz devlopman nan yon
koulè ble.Devlopman koulè a sispann ak adisyon a nan 1N HCl, ak absòbe a se
mezire spectrophotometrically nan 450 nm.Entansite a nan koulè a fòme se pwopòsyonèl ak la
kantite anzim prezan, epi li envers ki gen rapò ak kantite estanda yo teste nan menm fason an.
Atravè konparezon ak koub la kalibrasyon ki te fòme pa kalibratè yo bay, konsantrasyon nan
Lè sa a, se kalkile antikò netralize nan echantiyon an enkoni.
【MATERYÈL OBLIJE MEN PA BAY】
1. Dlo distile oswa deyonize
2. Pipèt presizyon: 10μL, 100μL, 200μL ak 1 mL
3. Konsèy pipèt jetab
4. lektè Microplate ki kapab li absòbe nan 450nm.
5. Papye absòbe
6. Papye grafik
7. Vortex mixer oswa ekivalan
【KOLEKSYON AK DEPO MOSYON】
1. Yo ka itilize echantiyon serom ak Plasma yo kolekte nan tib ki gen K2-EDTA pou twous sa a.
2. Espesimèn yo ta dwe kouvri epi yo ka estoke jiska 48 èdtan nan 2 °C - 8 °C anvan yo fè tès.
Espesimèn ki te kenbe pou yon tan ki pi long (jiska 6 mwa) ta dwe jele yon fwa sèlman nan -20 °C anvan tès la.
Evite repete sik friz-dekonjle.
PWOTÒKÒL
【Preparasyon reyaktif】
1. Yo dwe retire tout reyaktif yo nan frijidè epi yo dwe kite yo retounen nan tanperati chanm anvan yo itilize yo
(20 ° a 25 ° C).Sove tout reyaktif yo nan frijidè san pèdi tan apre yo fin itilize yo.
2. Tout echantiyon ak kontwòl yo ta dwe vortexed anvan ou itilize.
3. Preparasyon solisyon hACE2-HRP: Delye hACE2-HRP konsantre nan 1: 51 rapò dilution ak dilution.
Tanpon.Pa egzanp, delye 100 μL hACE2-HRP konsantre ak 5.0mL HRP Dilution Tanpon pou
fè yon solisyon hACE2-HRP.
4. 1× Preparasyon Solisyon Lave: Delye 20× Solisyon Lave a ak dlo deyonize oswa distile ak yon
rapò volim nan 1:19.Pa egzanp, delye 20 mL 20× Solisyon Lave ak 380 mL deyonize oswa
dlo distile pou fè 400 mL 1× Solisyon Lave.
【Pwosedi tès la】
1. Nan tib separe, aliquot 120μL nan solisyon an prepare hACE2-HRP.
2. Ajoute 6 μL kalibratè, echantiyon enkoni, kontwòl kalite nan chak tib epi melanje byen.
3. Transfere 100μL nan chak melanj ki prepare nan etap 2 a nan pwi mikwoplak korespondan yo dapre
nan konfigirasyon tès predesine.
3. Kouvri plak la ak Plak Sealer epi enkube a 37 ° C pou 30 minit.
4. Retire Plak Seal la epi lave plak la ak apeprè 300 μL 1× Solisyon Lave pou chak pwi pou kat fwa.
5. Tape plak la sou sèvyèt papye pou retire likid rezidyèl nan pwi yo apre etap lave yo.
6. Ajoute 100 μL Solisyon TMB nan chak pi epi enkube plak la nan fè nwa nan 20 - 25 ° C pou 20 minit.
7. Ajoute 50 μL Stop Solution nan chak pi pou sispann reyaksyon an.
8. Li absorbans nan lektè microplate nan 450 nm nan 10 minit (630nm kòm akseswar se
rekòmande pou pi wo pèfòmans presizyon).
