SARS-CoV-2 pribor za detekciju neutralizirajućih antitijela (ELISA)
【NAMJENA】
SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit je kompetitivni enzimski imunosorbentni test (ELISA) namijenjen za kvalitativno i semikvantitativno otkrivanje ukupnih neutralizirajućih antitijela na SARS-CoV-2 u ljudskom serumu i plazmi. Komplet za otkrivanje neutralizirajućih protutijela SARS-CoV-2 može se koristiti kao pomoć u identificiranju osoba s adaptivnim imunološkim odgovorom na SARS-CoV-2, što ukazuje na nedavnu ili prethodnu infekciju. Komplet za otkrivanje neutralizirajućih antitijela SARS-CoV-2 ne bi se trebao koristiti za dijagnosticiranje akutne infekcije SARS-CoV-2.
【UVOD】
Infekcije koronavirusom obično izazivaju reakcije neutralizirajućih protutijela. Stope serokonverzije u pacijenata s COVID-19 su 50%, odnosno 100% 7. odnosno 14. dana nakon pojave simptoma. Prema sadašnjim spoznajama, odgovarajuće protutijelo za neutralizaciju virusa u krvi prepoznato je kao cilj za određivanje učinkovitosti protutijela, a veća koncentracija neutralizirajućeg protutijela ukazuje na veću učinkovitost zaštite. Plaque Reduction Neutralization Test (PRNT) prepoznat je kao zlatni standard za otkrivanje neutralizirajućih protutijela. Međutim, zbog niske propusnosti i većih zahtjeva za rad, PRNT nije praktičan za veliku serodijagnostiku i procjenu cjepiva. Komplet za otkrivanje neutralizirajućih antitijela SARS-CoV-2 temelji se na metodologiji kompetitivne enzimske imunoanalize (ELISA), koja može detektirati neutralizirajuća antitijela u uzorku krvi, kao i posebno pristupiti razinama koncentracije ove vrste antitijela.
【Procedura ispitivanja】
1. U zasebne epruvete, alikvotirajte 120 μL pripremljene otopine hACE2-HRP.
2. Dodajte 6 μL kalibratora, nepoznatih uzoraka, kontrola kvalitete u svaku epruvetu i dobro promiješajte.
3. Prenesite 100 μL svake mješavine pripremljene u koraku 2 u odgovarajuće jažice mikropločice u skladu s unaprijed dizajniranom konfiguracijom testa.
3. Pokrijte ploču sredstvom za zatvaranje ploča i inkubirajte na 37°C 60 minuta.
4. Uklonite zatvarač ploče i četiri puta isperite ploču s približno 300 μL 1× otopine za pranje po jažici.
5. Lupnite ploču o papirnati ručnik kako biste uklonili zaostalu tekućinu u jažicama nakon koraka pranja.
6. Dodajte 100 μL TMB otopine u svaku jažicu i inkubirajte ploču u mraku na 20 – 25°C 20 minuta.
7. Dodajte 50 μL otopine za zaustavljanje u svaku jažicu kako biste zaustavili reakciju.
8. Očitajte apsorbanciju u čitaču mikropločica na 450 nm unutar 10 minuta (preporučuje se 630 nm kao dodatak za veću preciznost.
