SARS-COV-2 Neutraliziranje kompleta za otkrivanje antitijela （ELISA)
【Namjena upotreba】
SARS-COV-2 neutralizirajući komplet za otkrivanje antitijela je konkurentni test imunosorbensa povezanog s enzimom (ELISA) namijenjen kvalitativnom i polukvantitativnom otkrivanju ukupnih neutralizacijskih antitijela na SARS-COV-2 u ljudskom serumu i plazmi. SARS-COV-2 neutralizirajući komplet za otkrivanje antitijela može se koristiti kao pomoć u identificiranju pojedinaca s adaptivnim imunološkim odgovorom na SARS-COV-2, što ukazuje na nedavnu ili prethodnu infekciju. SARS-COV-2 neutralizirajući komplet za otkrivanje antitijela ne bi se trebao koristiti za dijagnosticiranje akutne infekcije SARS-COV-2.
【UVOD】
Koronavirusne infekcije obično induciraju neutralizirajuće odgovore antitijela. Stope serokonverzije u bolesnika s Coid-19 su 50% i 100% na dan 7 i 14. dana nakon pojave simptoma. Da bi se prezentiralo znanje, odgovarajuće antitijelo koje neutralizira virus u krvi prepoznata je kao meta za određivanje učinkovitosti antitijela i veća koncentracija neutralizirajućeg antitijela ukazuju na veću učinkovitost zaštite. Ispitivanje neutralizacije plaka (PRNT) prepoznat je kao zlatni standard za otkrivanje neutralizacijskih antitijela. Međutim, zbog niske propusnosti i većeg zahtjeva za rad, PRNT nije praktičan za serodijagnozu i procjenu cjepiva velikih razmjera. SARS-COV-2 neutralizirajući kit za otkrivanje antitijela temelji se na konkurentnom metodologiji imunosorbentnog ispitivanja (ELISA), koji može otkriti neutralizirajuće antitijelo u uzorku krvi, kao i posebno pristupiti razinama koncentracije ove vrste antitijela.
【Postupak ispitivanja】
1.U odvojenim cijevima, alikvot 120 μl pripremljene otopine HaCE2-HRP.
2.Dod 6 μl kalibratora, nepoznati uzorci, kontrole kvalitete u svakoj cijevi i dobro promiješajte.
3.Transfer 100 μl svake smjese pripremljen u koraku 2 u odgovarajuće jažice mikroploča u skladu s unaprijed određenom konfiguracijom testa.
3. Prikrijte ploču s pločicom za brtvljenje i inkubirajte na 37 ° C 60 minuta.
4. Osporavajte ploču za brtvljenje i operite ploču približno 300 μl otopine 1 × pranje u jažici četiri puta.
5. Postavite ploču na papirnatom ručniku kako biste uklonili zaostalu tekućinu u bunarima nakon koraka pranja.
6.Dod 100 μl otopine TMB u svaku jažicu i inkubirajte ploču u tami na 20 do 25 ° C 20 minuta.
7.Dod 50 μl otopine zaustavljanja u svaku bušotinu da biste zaustavili reakciju.
8. Pročitajte apsorbanciju u čitaču mikroploča na 450 nm u roku od 10 minuta (630Nm kao dodatak preporučuje se za veće precizne performanse.
