SARS-CoV-2 न्यूट्रलाइजिंग एंटीबॉडी डिटेक्शन किट (एलिसा)

【उपयोग का उद्देश्य】

SARS-CoV-2 न्यूट्रलाइज़िंग एंटीबॉडी डिटेक्शन किट एक प्रतिस्पर्धी एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख (ELISA) है, जिसका उद्देश्य मानव सीरम और प्लाज्मा में SARS-CoV-2 के कुल न्यूट्रलाइज़िंग एंटीबॉडी का गुणात्मक और अर्ध-मात्रात्मक पता लगाना है। SARS-CoV-2 न्यूट्रलाइजिंग एंटीबॉडी डिटेक्शन किट का उपयोग SARS-CoV-2 के प्रति अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया वाले व्यक्तियों की पहचान करने में सहायता के रूप में किया जा सकता है, जो हाल ही में या पूर्व संक्रमण का संकेत देता है। तीव्र SARS-CoV-2 संक्रमण के निदान के लिए SARS-CoV-2 न्यूट्रलाइजिंग एंटीबॉडी डिटेक्शन किट का उपयोग नहीं किया जाना चाहिए।

【परिचय】

कोरोना वायरस संक्रमण आमतौर पर निष्क्रिय करने वाली एंटीबॉडी प्रतिक्रियाओं को प्रेरित करता है। लक्षण शुरू होने के 7वें और 14वें दिन पर सीओवीआईडी-19 रोगियों में सेरोकन्वर्ज़न दर क्रमशः 50% और 100% है। ज्ञान प्रस्तुत करने के लिए, रक्त में संबंधित वायरस को निष्क्रिय करने वाले एंटीबॉडी को एंटीबॉडी प्रभावकारिता निर्धारित करने के लिए एक लक्ष्य के रूप में मान्यता प्राप्त है और निष्क्रिय करने वाले एंटीबॉडी की उच्च सांद्रता उच्च सुरक्षा प्रभावकारिता का संकेत देती है। प्लाक रिडक्शन न्यूट्रलाइजेशन टेस्ट (पीआरएनटी) को निष्क्रिय एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए स्वर्ण मानक के रूप में मान्यता दी जा रही है। हालाँकि, इसके कम थ्रूपुट और ऑपरेशन के लिए उच्च आवश्यकता के कारण, पीआरएनटी बड़े पैमाने पर सेरोडायग्नोसिस और वैक्सीन मूल्यांकन के लिए व्यावहारिक नहीं है। SARS-CoV-2 न्यूट्रलाइजिंग एंटीबॉडी डिटेक्शन किट प्रतिस्पर्धी एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट परख (एलिसा) पद्धति पर आधारित है, जो रक्त के नमूने में न्यूट्रलाइजिंग एंटीबॉडी का पता लगा सकता है और साथ ही विशेष रूप से इस प्रकार के एंटीबॉडी के एकाग्रता स्तर तक पहुंच सकता है।

 【परीक्षण प्रक्रिया】

1. अलग-अलग ट्यूबों में, तैयार hACE2-HRP सॉल्यूशन का 120μL एलिकोट करें।

2. प्रत्येक ट्यूब में 6 μL अंशशोधक, अज्ञात नमूने, गुणवत्ता नियंत्रण जोड़ें और अच्छी तरह मिलाएं।

3. चरण 2 में तैयार किए गए प्रत्येक मिश्रण के 100μL को पूर्व-डिज़ाइन किए गए परीक्षण कॉन्फ़िगरेशन के अनुसार संबंधित माइक्रोप्लेट कुओं में स्थानांतरित करें।

3.प्लेट को प्लेट सीलर से ढकें और 60 मिनट के लिए 37°C पर इनक्यूबेट करें।

4.प्लेट सीलर को हटा दें और प्लेट को लगभग 300 μL 1× वॉश सॉल्यूशन प्रति कुएं से चार बार धोएं।

5. कदमों को धोने के बाद कुओं में बचे हुए तरल पदार्थ को निकालने के लिए प्लेट को कागज़ के तौलिये पर थपथपाएँ।

6. प्रत्येक कुएं में 100 μL टीएमबी सॉल्यूशन डालें और प्लेट को 20 मिनट के लिए 20 - 25 डिग्री सेल्सियस पर अंधेरे में रखें।

7.प्रतिक्रिया को रोकने के लिए प्रत्येक कुएं में 50 μL स्टॉप सॉल्यूशन जोड़ें।

8.10 मिनट के भीतर 450 एनएम पर माइक्रोप्लेट रीडर में अवशोषण पढ़ें (उच्च परिशुद्धता प्रदर्शन के लिए सहायक उपकरण के रूप में 630 एनएम की सिफारिश की जाती है।