ʻO ka SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit (ELISA)
【KUMU】
Hoʻokumu ʻia ka SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit ma ke ʻano hoʻokūkū ELISA.
Ke hoʻohana nei i ka hoʻomaʻemaʻe receptor binding domain (RBD), protein mai ka protein spike viral (S) a me ka cell host
ka mea hoʻokipa ACE2, ua hoʻolālā ʻia kēia hoʻāʻo e hoʻohālike i ka launa pū ʻana o ka virus-host neutralizing.
Hoʻohui maikaʻi ʻia nā Calibrators, Quality Controls, a me serum a plasma samples i ka dilution
paʻa i loko o ka hACE2-HRP conjugate i hoʻokaʻawale ʻia i loko o nā paipu liʻiliʻi. A laila hoʻoili ʻia nā huila i loko
nā pūnāwai microplate i loaʻa i ka immobilized recombinant SARS-CoV-2 RBD fragment (RBD) no
incubation. I loko o ka incubation 30-minuke, ka RBD kūikawā antibody i loko o nā calibrators, QC a me
e hoʻokūkū nā laʻana me ka hACE2-HRP no ka hoʻopaʻa ʻana i ka RBD i hoʻopaʻa ʻia i loko o nā pūnāwai. Ma hope
i ka incubation, holoi ʻia nā pūnāwai i 4 mau manawa e wehe i ka conjugate hACE2-HRP unbound. He hopena o
Hoʻohui ʻia ʻo TMB a hoʻomoʻa ʻia no 20 mau minuke ma ka lumi wela, e hopena i ka ulu ʻana o kahi
kala uliuli. Hoʻopau ʻia ka hoʻomohala kala me ka hoʻohui ʻana o 1N HCl, a ʻo ka absorbance
ana spectrophotometric ma 450 nm. ʻO ka ikaika o ka waihoʻoluʻu i hanaʻia e like me ka
ka nui o ka enzyme i loaʻa, a pili ʻole i ka nui o nā maʻamau i ʻike ʻia ma ke ʻano like.
Ma o ka hoohalike ana me ka calibration curve i hanaia e na calibrators i haawiia, ka noonoo ana o
a laila helu ʻia ka neutralizing antibodies i ka hāpana ʻike ʻole.
【MAKEMAKE IA NA MEA AKA AOLE I HAAWI MAI】
1. ʻO ka wai i hoʻoheheʻe ʻia a i ʻole deionized
2. Nā pipette pololei: 10μL, 100μL, 200μL a me 1 mL
3. Nā ʻōlelo aʻoaʻo pipette hoʻopau
4. Hiki i ka mea heluhelu microplate ke heluhelu i ka absorbance ma 450nm.
5. Pepa hoʻoheheʻe
6. Pepa kiʻi
7. Mea hoʻohuihui Vortex a i ʻole like
【OHI A ME KA WAIWAI】
1. Hiki ke hoʻohana ʻia nā laʻana Serum a me Plasma i hōʻiliʻili ʻia i loko o nā paipu me K2-EDTA no kēia pahu.
2. Pono e hoʻopaʻa ʻia nā mea hoʻohālike a hiki ke mālama ʻia a hiki i 48 mau hola ma 2 °C - 8 °C ma mua o ka hoʻāʻo ʻana.
Pono e hoʻopaʻa ʻia nā mea hoʻohālike no ka manawa lōʻihi (a hiki i 6 mahina) hoʻokahi wale nō ma ka -20 °C ma mua o ka hoʻāʻo ʻana.
E hōʻalo i nā pōʻai hoʻoheheʻe-hau.
KULA
【Hoʻomākaukau Reagent】
1. Pono e lawe ʻia nā reagents a pau mai loko mai o ka refrigeration a ʻae ʻia e hoʻi i ka lumi wela ma mua o ka hoʻohana ʻana
(20° a i 25°C). E mālama i nā reagents a pau i loko o ka friji ma hope koke o ka hoʻohana ʻana.
2. Pono e vortex nā la'ana a me nā mana a pau ma mua o ka ho'ohana 'ana.
3. HACE2-HRP Hoʻomākaukau Hoʻomākaukau: Dilute hACE2-HRP concentrate ma 1: 51 dilution ratio me Dilution
Hoʻopaʻa. No ka laʻana, e hoʻoheheʻe i 100 μL o ka hACE2-HRP concentrate me 5.0mL o HRP Dilution Buffer i
hana i ka hāʻina hACE2-HRP.
4. 1× Holoi Hoʻomākaukau Hoʻomākaukau: E hoʻoheheʻe i ka 20 × Wash Solution me ka wai deionized a i ʻole ka wai me ka wai
ka nui lākiō o 1:19. No ka laʻana, e hoʻoheheʻe i 20 mL o 20 × Wash Solution me 380 mL o ka deionized a i ʻole.
wai hoʻoheheʻe e hana i 400 mL o 1 × Wash Solution.
【Kaʻina hana hoʻāʻo】
1. I loko o nā paipu ʻokoʻa, aliquot 120μL o ka HACE2-HRP Solution i hoʻomākaukau ʻia.
2. E hoʻohui i 6 μL o nā calibrators, nā mea ʻike ʻole ʻia, nā mana maikaʻi i kēlā me kēia paipu a hui maikaʻi.
3. E hoʻololi i 100μL o kēlā me kēia hui ʻana i hoʻomākaukau ʻia ma ka ʻanuʻu 2 i loko o nā luawai microplate e like me.
i ka hoʻonohonoho hoʻāʻo predesigned.
3. E uhi i ka pā me ka Plate Sealer a hoʻomohu i 37 ° C no 30 mau minuke.
4. Wehe i ka Plate Sealer a holoi i ka pā me ka 300 μL o 1 × Wash Solution no kēlā me kēia luawai no ʻehā manawa.
5. E kaomi i ka pā ma ke kāwele pepa e wehe i ke koena wai i loko o nā luawai ma hope o ka holoi ʻana.
6. E hoʻohui i 100 μL o ka TMB Solution i kēlā me kēia pūnāwai a hoʻokomo i ka pā i ka pōʻeleʻele ma 20 - 25 ° C no 20 mau minuke.
7. E hoʻohui i 50 μL o Stop Solution i kēlā me kēia pūnāwai e hoʻopau i ka hopena.
8. E heluhelu i ka absorbance i ka microplate reader ma 450 nm i loko o 10 minuke (630nm e like me
paipai ʻia no ka hana ʻoi aku ka pololei).