Kit de detección de anticorpos neutralizantes SARS-CoV-2 (ELISA)
【USO PREVISTO】
O kit de detección de anticorpos neutralizantes SARS-CoV-2 é un ensaio de inmunoabsorción ligado a encimas competitivos (ELISA) destinado á detección cualitativa e semicuantitativa de anticorpos neutralizantes totais contra SARS-CoV-2 en soro e plasma humanos. O kit de detección de anticorpos neutralizantes SARS-CoV-2 pódese utilizar como axuda para identificar individuos cunha resposta inmune adaptativa ao SARS-CoV-2, que indica unha infección recente ou previa. O kit de detección de anticorpos neutralizantes SARS-CoV-2 non debe usarse para diagnosticar a infección aguda por SARS-CoV-2.
【INTRODUCIÓN】
As infeccións por coronavirus normalmente inducen respostas de anticorpos neutralizantes. As taxas de seroconversión en pacientes con COVID-19 son do 50% e do 100% os días 7 e 14 despois da aparición dos síntomas, respectivamente. Para presentar o coñecemento, o anticorpo neutralizador do virus correspondente no sangue é un obxectivo recoñecido para determinar a eficacia do anticorpo e unha concentración máis elevada do anticorpo neutralizante indica unha maior eficacia de protección. A proba de neutralización de redución de placas (PRNT) está sendo recoñecido como o patrón de ouro para detectar anticorpos neutralizantes. Non obstante, debido ao seu baixo rendemento e ao seu maior requisito de funcionamento, o PRNT non é práctico para o serodiagnóstico e a avaliación de vacinas a gran escala. O kit de detección de anticorpos neutralizantes SARS-CoV-2 baséase na metodoloxía ELISA (Competitive Enzyme-Linked Inmunosorbent Assay), que permite detectar o anticorpo neutralizante na mostra de sangue así como acceder especialmente aos niveis de concentración deste tipo de anticorpos.
【Procedemento da proba】
1.En tubos separados, alícuota 120 μL da solución hACE2-HRP preparada.
2.Engadir 6 μL de calibradores, mostras descoñecidas, controis de calidade en cada tubo e mesturar ben.
3.Transfire 100 μL de cada mestura preparada no paso 2 aos pozos de microplacas correspondentes segundo a configuración de proba deseñada previamente.
3.Cubra a placa con Plate Sealer e incube a 37 °C durante 60 minutos.
4.Retire o selador de placas e lave a placa con aproximadamente 300 μL de solución de lavado 1× por pozo catro veces.
5.Toca o prato sobre unha toalla de papel para eliminar o líquido residual dos pozos despois dos pasos de lavado.
6.Engadir 100 μL de solución de TMB a cada pozo e incubar a placa na escuridade a 20 – 25 °C durante 20 minutos.
7.Engadir 50 μL de solución de parada a cada pozo para deter a reacción.
8.Lea a absorbancia no lector de microplacas a 450 nm en 10 minutos (recoméndase 630 nm como accesorio para un rendemento de maior precisión.
