Kit Lorgaidh Antibody Neutralizing SARS-CoV-2 (ELISA)
【PRÌOMHACHAS】
Tha an Kit Lorgaidh Antibody Neutralizing SARS-CoV-2 stèidhichte air modh-obrach farpaiseach ELISA.
A ’cleachdadh fearann ceangail gabhadair purraichte (RBD), pròtain bhon phròtain spike viral (S) agus an cealla aoigheachd
receptor ACE2, tha an deuchainn seo air a dhealbh gus a bhith coltach ris an eadar-obrachadh neodachaidh le aoigheachd bhìoras.
Tha calibrators, Smachdan Càileachd, agus sampallan serum no plasma air an measgachadh leotha fhèin gu math ann an lagachadh
bufair anns a bheil hACE2-HRP conjugate air a roinn ann an tiùban beaga. An uairsin thèid na measgachaidhean a ghluasad a-steach
na tobraichean microplate anns a bheil criomag ath-leasaichte SARS-CoV-2 RBD (RBD) airson
goir. Rè an goir 30-mionaid, an antibody sònraichte RBD anns na calibrators, QC agus
bidh sampaill a’ farpais ris an hACE2-HRP airson a bhith a’ ceangal an RBD gun ghluasad anns na tobraichean. Às deidh
an goir, tha na tobraichean air an nighe 4 tursan gus co-luachadh hACE2-HRP neo-cheangailte a thoirt air falbh. Fuasgladh de
Tha TMB an uairsin air a chur ris agus air a ghoil airson 20 mionaid aig teòthachd an t-seòmair, a’ leantainn gu leasachadh a
dath gorm. Tha an leasachadh dath air a stad le bhith a’ cur 1N HCl ris, agus tha an sùghadh
air a thomhas gu speactrophotometrically aig 450 nm. Tha dian an dath a chaidh a chruthachadh a rèir an
an ìre de enzyme a tha an làthair, agus gu mì-chothromach co-cheangailte ris an ìre de inbhean a chaidh a mheasadh san aon dòigh.
Tro choimeas ris an lùb calibration a chruthaich na calibrators a chaidh a sholarachadh, tha an dùmhlachd de
bidh neodachadh antibodies anns an sampall neo-aithnichte an uairsin air a thomhas.
【Stuthan a tha riatanach ach NACH EIL air a thoirt seachad】
1. Uisge grùide no deionized
2. Precision pipettes: 10μL, 100μL,200μL agus 1 mL
3. Molaidhean pìoba cuidhteasach
4. Microplate leughadair comasach air leughadh absorbance aig 450nm.
5. Pàipear neo-ghluasadach
6. Pàipear graf
7. Measgadair vortex no a leithid
【CRUINNEACHADH SPECIMEN AGUS STÒR】
1. Faodar sampallan Serum agus Plasma a chaidh a chruinneachadh ann an tiùban anns a bheil K2-EDTA a chleachdadh airson a ’phiseag seo.
2. Bu chòir crìoch a chur air sampallan agus faodar an stòradh airson suas ri 48 uair aig 2 °C - 8 °C mus tèid a mheasadh.
Bu chòir sampallan a tha air an cumail airson ùine nas fhaide (suas ri 6 mìosan) a bhith air an reothadh dìreach aon turas aig -20 ° C ron assay.
Seachain cuairtean reòta-loisgeach a-rithist.
PROTOCOL
【Ullachadh reactant】
1. Feumar a h-uile reagents a thoirt a-mach à fionnarachadh agus leigeil leotha tilleadh gu teòthachd an t-seòmair mus tèid a chleachdadh
(20 ° gu 25 ° C). Sàbhail a h-uile ath-bheachdan san fhrigeradair gu sgiobalta às deidh a chleachdadh.
2. Bu chòir a h-uile sampall agus smachd a bhith vortexed mus tèid a chleachdadh.
3. Ullachadh fuasglaidh hACE2-HRP: caolaich dùmhlachd hACE2-HRP aig co-mheas caolachaidh 1: 51 le dilution
Bufair. Mar eisimpleir, caolaich 100 μL de hACE2-HRP dùmhlachd le 5.0mL de HRP Dilution Buffer gu
Dèan fuasgladh hACE2-HRP.
4. 1 × Ullachadh fuasgladh nighe: caolaich am fuasgladh nighe 20 × le uisge deionized no grùide le a
tomhas-lìonaidh co-mheas 1:19. Mar eisimpleir, caolaich 20 mL de 20 × Wash Solution le 380 mL de deionized no
uisge grùide gus 400 mL de 1 × Wash Solution a dhèanamh.
【Modh-obrach deuchainn】
1. Ann an tiùban air leth, cuir a-mach 120μL den fhuasgladh hACE2-HRP ullaichte.
2. Cuir 6 μL de calibrators, sampaill neo-aithnichte, smachdan càileachd anns gach tiùb agus measgachadh gu math.
3. Cuir thairis 100 μL de gach measgachadh a chaidh ullachadh ann an ceum 2 gu tobraichean microplate co-fhreagarrach a rèir
gu rèiteachadh deuchainn ro-dhealbhaichte.
3. Còmhdaich an truinnsear le Plate Sealer agus goir aig 37 ° C airson 30 mionaid.
4. Thoir air falbh an Plate Sealer agus nighidh an truinnsear le mu 300 μL de 1 × Wash Solution gach tobar airson ceithir tursan.
5. Tap air a’ phlàta air tuáille pàipeir gus an leaghan a tha air fhàgail a thoirt air falbh anns na tobraichean às deidh ceumannan nighe.
6. Cuir 100 μL de TMB Solution ri gach tobar agus goir a’ phlàta san dorchadas aig 20 - 25 ° C airson 20 mionaid.
7. Cuir 50 μL de Stop Solution ris gach tobar gus stad a chur air an fhreagairt.
8. Leugh an sùghaidh ann an leughadair microplate aig 450 nm taobh a-staigh 10 mionaidean (630nm mar accessory is
air a mholadh airson coileanadh mionaideachd nas àirde).