Trealamh Braite Antashubstainte Neodraithe SARS-CoV-2 (ELISA)
【PRIONSABAL】
Tá an Kit Braite Antashubstainte Neodraithe SARS-CoV-2 bunaithe ar mhodheolaíocht iomaíoch ELISA.
Ag baint úsáide as fearann ceangailteach gabhdóra íonaithe (RBD), próitéin ón próitéin spike víreasach (S) agus an chill óstach
receptor ACE2, tá an tástáil seo deartha chun aithris a dhéanamh ar an idirghníomhaíocht neodraithe víreas-óstach.
Déantar calabróirí, Rialuithe Cáilíochta, agus samplaí serum nó plasma a mheascadh go maith ina n-aonar i gcaolú
maolán ina bhfuil comhchuingeach hACE2-HRP comhroinnte i bhfeadáin bheaga. Ansin aistrítear na meascáin isteach
na toibreacha micreaphláta ina bhfuil blúirín athchuingreach SARS-CoV-2 RBD (RBD) díluailithe le haghaidh
goir. Le linn an goir 30 nóiméad, an antashubstaint shonrach RBD sna calabróirí, QC agus
Beidh samplaí in iomaíocht leis an hACE2-HRP le haghaidh ceangal sonrach a dhéanamh ar an RBD díluailithe sna toibreacha. Tar éis
an gor, nitear na toibreacha 4 huaire chun comhchuingeach hACE2-HRP neamhcheangailte a bhaint. Réiteach de
Cuirtear TMB leis agus gortar é ansin ar feadh 20 nóiméad ag teocht an tseomra, rud a fhágann go bhforbraítear a
dath gorm. Stoptar an fhorbairt dath le 1N HCl a chur leis, agus tá an t-ionsúchtadh
tomhaiste go speictrophotometric ag 450 nm. Tá déine an dath a fhoirmítear comhréireach leis an
méid na heinsíme atá i láthair, agus tá baint aige go contrártha le méid na gcaighdeán a mheastar ar an mbealach céanna.
Trí chomparáid a dhéanamh leis an gcuar calabrúcháin atá déanta ag na calabróirí a sholáthraítear, tá tiúchan na
déantar neodrú antasubstaintí sa sampla anaithnid a ríomh ansin.
【ÁBHAR ATÁ TEASTÁIL ACH NÁ SOCRÚ】
1. Uisce driogtha nó dí-ianaithe
2. Pípéid beachtais: 10μL, 100μL, 200μL agus 1 mL
3. Leideanna pípéad indiúscartha
4. Léitheoir microplate in ann absorbance a léamh ag 450nm.
5. Páipéar ionsúiteach
6. Grafpháipéar
7. Meascthóir vortex nó a chomhionann
【BAILIÚ AGUS STÓRÁIL EISEAMHRA】
1. Is féidir samplaí Séiream agus Plasma a bhailítear i bhfeadáin ina bhfuil K2-EDTA a úsáid don trealamh seo.
2. Ba chóir teorainn a chur le heiseamail agus féadfar iad a stóráil ar feadh suas le 48 uair ag 2 °C - 8 °C roimh an measúnú.
Níor cheart eiseamail a choinnítear ar feadh tréimhse níos faide (suas le 6 mhí) a reoite ach uair amháin ag -20 °C roimh an measúnú.
Seachain timthriallta reo-leá arís agus arís eile.
PRÓTACAL
【Ullmhúchán Imoibrí】
1. Ní mór na himoibrithe go léir a thógáil amach as cuisniú agus ligean dóibh filleadh ar theocht an tseomra roimh úsáid
(20° go 25°C). Sábháil na himoibrithe go léir sa chuisneoir go pras tar éis é a úsáid.
2. Ba chóir gach sampla agus rialú a vortexed roimh úsáid.
3. Ullmhúchán Réitigh hACE2-HRP: caolaigh tiúchan hACE2-HRP ag cóimheas caolaithe 1: 51 le caolú
Maolán. Mar shampla, caolaigh 100 μL de chomhchruinniú hACE2-HRP le 5.0mL de Mhaoláin Caolaithe HRP go
réiteach hACE2-HRP a dhéanamh.
4. Ullmhúchán Réitigh Nigh 1 ×: Caolaigh an Réiteach Nigh 20 × le huisce dí-ianaithe nó driogtha le a
cóimheas toirte de 1:19. Mar shampla, caolaigh 20 mL de Réiteach Nigh 20 × le 380 ml de dhí-ianaithe nó
uisce driogtha a dhéanamh 400 ml de 1 × Nigh Réiteach.
【Nós Imeachta Tástála】
1. I feadáin ar leith, aliquot 120μL den Réiteach hACE2-HRP ullmhaithe.
2. Cuir 6 μL de chalabróirí, samplaí anaithnid, rialuithe cáilíochta i ngach feadán agus meascán maith.
3. Aistrigh 100μL de gach meascán a ullmhaítear sa chéim 2 isteach sna toibreacha microplate comhfhreagracha de réir
le cumraíocht tástála réamhdheartha.
3. Clúdaigh an pláta le Séalaitheoir Pláta agus gor ag 37°C ar feadh 30 nóiméad.
4. Bain an Séalaithe Pláta agus nigh an pláta le thart ar 300 μL de Réiteach Nigh 1 × in aghaidh an tobair ceithre huaire.
5. Beartaíonn an pláta ar thuáille páipéir chun leacht iarmharach a bhaint as na toibreacha tar éis céimeanna níocháin.
6. Cuir 100 μL de thuaslagán TMB le gach tobar agus gor an pláta sa dorchadas ag 20 - 25°C ar feadh 20 nóiméad.
7. Cuir 50 μL de Réiteach Stop le gach tobar chun an t-imoibriú a stopadh.
8. Léigh an absorbance i léitheoir microplate ag 450 nm laistigh de 10 nóiméad (630nm mar accessory is
molta le haghaidh feidhmíochta cruinneas níos airde).