Trealamh Braite Antasubstainte Neodraithe SARS-COV-2 (ELISA)
【Prionsabal】
Tá an trealamh braite antasubstainte SARS-COV-2 bunaithe ar mhodheolaíocht iomaíoch ELISA.
Ag baint úsáide as fearann ceangailteach glacadóra íonaithe (RBD), próitéin ón bpróitéin spíce víreasach agus an chill óstach
Tá an tástáil seo deartha chun an t-idirghníomhaíocht neodraithe víreas-óstach a aithris.
Déantar calibrators, rialuithe cáilíochta, agus samplaí serum nó plasma a mheascadh go maith ina n -aonar i gcaolú
Maolán ina bhfuil HACE2-HRP comhchuingeach i bhfeadáin bheaga. Ansin aistrítear na meascáin i
Na toibreacha microplate ina bhfuil blúire RBD athchuingreach doghluaisteachta (RBD)
Goir. Le linn an ghoir 30 nóiméad, an antasubstaint shonrach RBD sna calibrators, QC agus
Beidh samplaí in iomaíocht leis an HACE2-HRP chun an RBD a dhíluailiú sna toibreacha a cheangal go sonrach. I bhfianaise
An goir, déantar na toibreacha a ní 4 huaire chun comhchuinge HACE2-HRP neamhcheangailte a bhaint. Réiteach de
Ansin cuirtear TMB leis agus déantar é a ghoradh ar feadh 20 nóiméad ag teocht an tseomra, agus mar thoradh air sin forbraítear a
dath gorm. Cuirtear stop leis an bhforbairt datha le 1N HCl a chur leis, agus tá an t -ionsúiteacht
Speictreafótaiméadrach tomhaiste ag 450 nm. Tá déine an datha a fhoirmítear i gcomhréir leis an
Méid na heinsíme atá i láthair, agus baineann sé go contrártha le méid na gcaighdeán a mheastar ar an mbealach céanna.
Trí chomparáid a dhéanamh leis an gcuar calabrúcháin a chruthaíonn na calibrators a chuirtear ar fáil, tiúchan na
Ríomhtar antasubstaintí neodraithe sa sampla anaithnid ansin.
【Ábhair atá ag teastáil ach gan a bheith curtha ar fáil】
1. Uisce driogtha nó dí -ianaithe
2. Pípéid Beachtais: 10μl, 100μl, 200μl agus 1 ml
3. Leideanna Pípéad Indiúscartha
.
5. Páipéar ionsúite
6. Grafpháipéar
7. Meascthóir Vortex nó a chomhionann
【Bailiú agus stóráil eiseamal】
1. Is féidir samplaí serum agus plasma a bhailítear i bhfeadáin ina bhfuil K2-EDTA a úsáid don trealamh seo.
2 Ba chóir na heiseamail a chaipín agus is féidir iad a stóráil ar feadh suas le 48 uair an chloig ag 2 ° C - 8 ° C sula ndéantar iad a mheas.
Níor chóir eiseamail a reáchtáiltear ar feadh tréimhse níos faide (suas le 6 mhí) a reo ach uair amháin ag -20 ° C roimh mheasúnú.
Seachain timthriallta reo-leá arís agus arís eile.
Prótacal
【Ullmhú imoibrí】
Ní mór gach imoibrí a thógáil amach as cuisniú agus cead a thabhairt filleadh ar theocht an tseomra sula n -úsáidtear iad
(20 ° go 25 ° C). Sábháil gach imoibrí i gcuisneoir go pras tar éis é a úsáid.
2 Ba chóir na samplaí agus na rialuithe go léir a vortexed sula n -úsáidtear iad.
3. Ullmhú tuaslagáin HACE2-HRP: Caol HACE2-HRP ag díriú ag cóimheas caolaithe 1: 51 le caolú
Maolán. Mar shampla, caolú 100 μl de HACE2-HRP le 5.0ml de mhaolán caolaithe HRP go
Déan réiteach HACE2-HRP.
4. 1 × Ullmhú tuaslagáin níocháin: Caolaigh an tuaslagán níocháin 20 × le huisce dí -ianaithe nó driogtha le a
Cóimheas toirte 1:19. Mar shampla, caolaigh 20 ml de thuaslagán 20 × níocháin le 380 ml de dhí -ianú nó
Uisce driogtha chun 400 ml de thuaslagán níocháin a dhéanamh.
【Nós imeachta tástála】
1. I bhfeadáin ar leith, aliquot 120μl den tuaslagán ullmhaithe HRP.
2. Cuir 6 μl de chalabróirí, samplaí anaithnid, rialuithe cáilíochta i ngach feadán agus meascadh go maith.
3. Aistriú 100μl de gach meascán a ullmhaítear i gCéim 2 i dtoibreacha microplate comhfhreagracha de réir
le cumraíocht tástála réamhshainithe.
3. Clúdaigh an pláta le sealer pláta agus goir ag 37 ° C ar feadh 30 nóiméad.
4. Bain an sealer pláta agus nigh an pláta le thart ar 300 μl de thuaslagán 1 × níocháin in aghaidh an tobair le haghaidh ceithre huaire.
5 Beartaíonn an pláta ar thuáille páipéir chun leacht iarmharach a bhaint sna toibreacha tar éis céimeanna níocháin.
6. Cuir 100 μl de thuaslagán TMB le gach tobar agus cuir an pláta i ndorcha i 20 - 25 ° C ar feadh 20 nóiméad.
7. Cuir 50 μl de thuaslagán stad le gach tobar chun an t -imoibriú a stopadh.
8. Léigh an t -ionsúiteacht i léitheoir microplate ag 450 nm laistigh de 10 nóiméad (630nm mar atá cúlpháirtí
Molta le haghaidh feidhmíocht bheachtais níos airde).