Kit de détection d'anticorps neutralisants SARS-CoV-2 (ELISA)
【UTILISATION PRÉVUE】
Le kit de détection des anticorps neutralisants du SRAS-CoV-2 est un test immuno-enzymatique compétitif (ELISA) destiné à la détection qualitative et semi-quantitative des anticorps neutralisants totaux contre le SRAS-CoV-2 dans le sérum et le plasma humains. Le kit de détection des anticorps neutralisants du SRAS-CoV-2 peut être utilisé pour aider à identifier les personnes présentant une réponse immunitaire adaptative au SRAS-CoV-2, indiquant une infection récente ou antérieure. Le kit de détection des anticorps neutralisants du SRAS-CoV-2 ne doit pas être utilisé pour diagnostiquer une infection aiguë par le SRAS-CoV-2.
【INTRODUCTION】
Les infections à coronavirus induisent généralement des réponses en anticorps neutralisants. Les taux de séroconversion chez les patients atteints de COVID-19 sont respectivement de 50 % et 100 % aux jours 7 et 14 après l’apparition des symptômes. À l'heure actuelle, l'anticorps neutralisant le virus correspondant dans le sang est reconnu comme une cible pour déterminer l'efficacité de l'anticorps et une concentration plus élevée de l'anticorps neutralisant indique une efficacité de protection plus élevée. Le test de neutralisation par réduction de plaque (PRNT) est reconnu comme la référence en matière de détection des anticorps neutralisants. Cependant, en raison de son faible débit et de ses exigences opérationnelles plus élevées, le PRNT n’est pas pratique pour le sérodiagnostic et l’évaluation des vaccins à grande échelle. Le kit de détection des anticorps neutralisants du SRAS-CoV-2 est basé sur la méthodologie ELISA (Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), qui peut détecter l'anticorps neutralisant dans un échantillon de sang ainsi qu'accéder spécialement aux niveaux de concentration de ce type d'anticorps.
【Procédure d'essai】
1. Dans des tubes séparés, aliquotez 120 μL de la solution hACE2-HRP préparée.
2.Ajouter 6 μL de calibrateurs, d'échantillons inconnus, de contrôles qualité dans chaque tube et bien mélanger.
3. Transférez 100 μL de chaque mélange préparé à l’étape 2 dans les puits de microplaques correspondants selon la configuration de test prédéfinie.
3. Couvrir la plaque avec Plate Sealer et incuber à 37°C pendant 60 minutes.
4. Retirez le scellant pour plaque et lavez la plaque avec environ 300 μL de solution de lavage 1× par puits quatre fois.
5.Tapotez la plaque sur une serviette en papier pour éliminer le liquide résiduel dans les puits après les étapes de lavage.
6.Ajoutez 100 μL de solution TMB dans chaque puits et incubez la plaque dans l'obscurité à 20 – 25°C pendant 20 minutes.
7.Ajoutez 50 μL de solution d'arrêt dans chaque puits pour arrêter la réaction.
8.Lisez l'absorbance dans le lecteur de microplaques à 450 nm dans les 10 minutes (630 nm comme accessoire est recommandé pour des performances de plus grande précision.
