SARS-CoV-2 neutraloivan vasta-aineen tunnistussarja (ELISA)
【KÄYTTÖTARKOITUS】
SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit on kilpaileva entsyymi-immunosorbenttimääritys (ELISA), joka on tarkoitettu SARS-CoV-2:n neutraloivien vasta-aineiden kvalitatiiviseen ja semikvantitatiiviseen havaitsemiseen ihmisen seerumissa ja plasmassa. SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit -pakkausta voidaan käyttää apuna sellaisten henkilöiden tunnistamisessa, joilla on adaptiivinen immuunivaste SARS-CoV-2:ta vastaan, mikä osoittaa äskettäin tai aikaisemman tartunnan. SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit -sarjaa ei tule käyttää akuutin SARS-CoV-2-infektion diagnosointiin.
【JOHDANTO】
Koronavirusinfektiot aiheuttavat tyypillisesti neutraloivia vasta-ainevasteita. Serokonversioluvut COVID-19-potilailla ovat 50 % ja 100 % päivänä 7 ja 14 päivänä oireiden alkamisen jälkeen. Tämän tiedon mukaan vastaava virusta neutraloiva vasta-aine veressä on tunnustettu kohteena vasta-aineen tehokkuuden määrittämisessä ja neutraloivan vasta-aineen korkeampi pitoisuus osoittaa korkeampaa suojatehoa. Plaque Reduction Neutralization Test (PRNT) on tunnustettu kultaiseksi standardiksi neutraloivien vasta-aineiden havaitsemisessa. Alhaisen suorituskyvyn ja korkeamman toiminnan vaatimuksensa vuoksi PRNT ei kuitenkaan ole käytännöllinen laajamittaisessa serodiagnosissa ja rokotteen arvioinnissa. SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit perustuu Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) -metodologiaan, joka pystyy havaitsemaan neutraloivan vasta-aineen verinäytteestä sekä saavuttamaan erityisesti tämän tyyppisten vasta-aineiden pitoisuustasot.
【Testimenettely】
1.Jaa erillisiin putkiin 120 µl valmistettua hACE2-HRP-liuosta.
2.Lisää jokaiseen putkeen 6 μl kalibraattoreita, tuntemattomia näytteitä, laadunvalvontalaitteita ja sekoita hyvin.
3. Siirrä 100 μl kutakin vaiheessa 2 valmistettua seosta vastaaviin mikrolevyn kuoppiin ennalta suunnitellun testikonfiguraation mukaisesti.
3. Peitä levy Plate Sealerillä ja inkuboi 37 °C:ssa 60 minuuttia.
4.Poista levytiiviste ja pese levy noin 300 μl:lla 1× pesuliuosta kuoppaa kohti neljä kertaa.
5. Napauta levyä paperipyyhkeellä poistaaksesi kuopista pesuvaiheiden jälkeen jäänyt neste.
6. Lisää 100 μl TMB-liuosta jokaiseen kuoppaan ja inkuboi levyä pimeässä 20–25 °C:ssa 20 minuuttia.
7. Lisää 50 μL pysäytysliuosta jokaiseen kuoppaan reaktion pysäyttämiseksi.
8.Lue absorbanssi mikrolevylukijasta 450 nm:ssä 10 minuutin sisällä (630 nm:n suositeltava lisävaruste paremman tarkkuuden saavuttamiseksi).
