کیت تشخیص آنتی بادی خنثی کننده SARS-CoV-2 (ELISA)

【استفاده مورد نظر】

کیت تشخیص آنتی‌بادی خنثی‌کننده SARS-CoV-2 یک سنجش ایمنی متصل به آنزیم رقابتی (ELISA) است که برای تشخیص کیفی و نیمه کمی کل آنتی‌بادی‌های خنثی‌کننده SARS-CoV-2 در سرم و پلاسمای انسانی در نظر گرفته شده است. کیت تشخیص آنتی بادی خنثی کننده SARS-CoV-2 می تواند به عنوان کمکی در شناسایی افراد دارای پاسخ ایمنی سازگار به SARS-CoV-2 استفاده شود که نشان دهنده عفونت اخیر یا قبلی است. کیت تشخیص آنتی بادی خنثی کننده SARS-CoV-2 نباید برای تشخیص عفونت حاد SARS-CoV-2 استفاده شود.

【مقدمه】

عفونت‌های کروناویروس معمولاً پاسخ‌های آنتی‌بادی خنثی‌کننده را القا می‌کنند. نرخ تبدیل سرمی در بیماران COVID-19 به ترتیب 50% و 100% در روز 7 و 14 پس از شروع علائم است. برای ارائه دانش، آنتی بادی خنثی کننده ویروس مربوطه در خون به عنوان یک هدف برای تعیین اثربخشی آنتی بادی شناخته شده است و غلظت بالاتر آنتی بادی خنثی کننده نشان دهنده کارایی حفاظتی بالاتر است. تست خنثی سازی کاهش پلاک (PRNT) به عنوان استاندارد طلایی برای تشخیص آنتی بادی های خنثی کننده شناخته شده است. با این حال، به دلیل توان عملیاتی کم و نیاز بیشتر به عملیات، PRNT برای تشخیص سرووده در مقیاس بزرگ و ارزیابی واکسن عملی نیست. کیت تشخیص آنتی بادی خنثی کننده SARS-CoV-2 بر اساس روش سنجش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم رقابتی (ELISA) است که می تواند آنتی بادی خنثی کننده را در نمونه خون تشخیص دهد و همچنین به طور ویژه به سطوح غلظت این نوع آنتی بادی دسترسی پیدا کند.

 【روش تست】

1. در لوله های جداگانه، 120μL از محلول آماده شده hACE2-HRP را به مقدار کافی مصرف کنید.

2. 6 میکرولیتر کالیبراتور، نمونه ناشناخته، کنترل کیفیت را در هر لوله اضافه کنید و خوب مخلوط کنید.

3. 100μL از هر مخلوط تهیه شده در مرحله 2 را با توجه به پیکربندی آزمایشی از پیش طراحی شده به چاه های میکروپلیتی مربوطه انتقال دهید.

3. روی صفحه را با Plate Sealer بپوشانید و به مدت 60 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوبه کنید.

4. Plate Sealer را بردارید و بشقاب را با حدود 300 میکرولیتر محلول شستشو 1× در هر چاه برای چهار بار بشویید.

5. بشقاب را روی حوله کاغذی بکوبید تا پس از مراحل شستشو، مایع باقی مانده در چاهک ها خارج شود.

6. 100 میکرولیتر محلول TMB را به هر چاهک اضافه کنید و بشقاب را در تاریکی در دمای 20 تا 25 درجه سانتیگراد به مدت 20 دقیقه انکوبه کنید.

7. 50 میکرولیتر محلول توقف را به هر چاهک اضافه کنید تا واکنش متوقف شود.

8. جذب را در میکروپلیت خوان در 450 نانومتر در عرض 10 دقیقه بخوانید (630 نانومتر به عنوان لوازم جانبی برای عملکرد دقیق تر توصیه می شود.