کیت تشخیص اسید نوکلئیک ویروس آبله میمون (MPV).

این کیت حاوی معرف هایی برای پردازش 48 آزمایش یا کنترل کیفیت است که شامل اجزای زیر می شود:

معرف A

معرفB

توجه: اجزای شماره های مختلف دسته ای را نمی توان به جای هم استفاده کرد

【شرایط نگهداری و ماندگاری】

1. معرف A/B را می توان در دمای 2-30 درجه سانتی گراد نگهداری کرد و ماندگاری آن 10 ماه است.

2.لطفاً پوشش لوله آزمایش را فقط زمانی که برای آزمایش آماده هستید باز کنید.

3. از لوله های آزمایش بیش از تاریخ انقضا استفاده نکنید.

4. از لوله تشخیص نشت استفاده نکنید.

【ابزار قابل اجرا】

مناسب برای سیستم آنالیز LC480 PCR، سیستم آنالیز خودکار PCR Gentier 48E، سیستم آنالیز PCR ABI7500.

【نمونه مورد نیاز】

1.انواع نمونه کاربردی: نمونه سواب گلو.

2. محلول نمونه برداری:پس از تأیید، توصیه می شود از نرمال سالین یا لوله حفظ ویروس تولید شده توسط زیست شناسی Hangzhou Testsea برای جمع آوری نمونه استفاده کنید.

سواب گلو:لوزه های دو طرفه حلقی و دیواره خلفی حلق را با سواب نمونه برداری استریل یکبار مصرف پاک کنید، سواب را در لوله حاوی 3 میلی لیتر محلول نمونه برداری فرو ببرید، دم را دور بیندازید و پوشش لوله را سفت کنید.

3. ذخیره سازی و تحویل نمونه:نمونه های مورد آزمایش باید در اسرع وقت آزمایش شوند.دمای حمل و نقل باید در 2 ~ 8 درجه سانتیگراد نگه داشته شود. نمونه هایی که می توانند در عرض 24 ساعت آزمایش شوند را می توان در دمای 2 ~ 8 درجه سانتیگراد نگهداری کرد و اگر نمونه ها در عرض 24 ساعت قابل آزمایش نباشند، باید در کمتر یا مساوی نگهداری شوند. تا -70 درجه سانتیگراد (اگر شرایط ذخیره سازی 70- درجه وجود نداشته باشد، می توان آن را به طور موقت در دمای -20 درجه سانتیگراد ذخیره کرد)، از تکرار خودداری کنید.

انجماد و ذوب.

4. جمع آوری نمونه، ذخیره سازی و حمل و نقل مناسب برای عملکرد این محصول بسیار مهم است.

【روش تست】

1. پردازش نمونه و افزودن نمونه

1.1 پردازش نمونه

پس از اختلاط محلول نمونه برداری فوق با نمونه ها، 30 میکرولیتر از نمونه را داخل لوله معرف رهاسازی DNA برده و به طور یکنواخت مخلوط کنید.

1.2 در حال بارگذاری

20 میکرولیتر از معرف بازسازی را بردارید و آن را به معرف تشخیص MPV اضافه کنید، 5 میکرولیتر از نمونه فرآوری شده فوق را اضافه کنید (کنترل مثبت و کنترل منفی باید به موازات نمونه ها پردازش شوند)، درپوش لوله را بپوشانید، آن را با دور 2000 به مدت 10 سانتریفیوژ کنید. ثانیه

2. تقویت PCR

2.1 صفحه/لوله های PCR آماده شده را روی دستگاه PCR فلورسانس قرار دهید، کنترل منفی و کنترل مثبت باید برای هر آزمایش تنظیم شود.

2.2 تنظیم کانال فلورسنت：

1) کانال FAM را برای تشخیص MPV انتخاب کنید.

2) کانال HEX/VIC را برای تشخیص ژن کنترل داخلی انتخاب کنید.

3. تجزیه و تحلیل نتایج

خط پایه را بالای بالاترین نقطه منحنی فلورسنت کنترل منفی قرار دهید.

4-کنترل کیفیت

4.1 کنترل منفی: هیچ مقدار Ct در کانال FAM، HEX/VIC یا Ct 40 ； شناسایی نشده است.

4.2 کنترل مثبت: در کانال FAM، HEX/VIC، Ct≤40；

4.3 الزامات فوق باید در همان آزمایش برآورده شود، در غیر این صورت نتایج آزمایش نامعتبر است و آزمایش نیاز به تکرار دارد.

【قطع ارزش】

یک نمونه زمانی مثبت در نظر گرفته می شود که: توالی هدف Ct≤40، ژن کنترل داخلی Ct≤40.

【تفسیر نتایج】

پس از گذراندن کنترل کیفیت، کاربران باید بررسی کنند که آیا منحنی تقویت برای هر نمونه در کانال HEX/VIC وجود دارد یا خیر، اگر وجود دارد و با Ct≤40، نشان می دهد که ژن کنترل داخلی با موفقیت تقویت شده است و این آزمایش خاص معتبر است.کاربران می توانند به تجزیه و تحلیل پیگیری ادامه دهند:

3. برای نمونه هایی با تقویت ژن کنترل داخلی (HEX/VIC

کانال، Ct≤40، یا بدون منحنی تقویت)، بار ویروسی کم یا وجود بازدارنده PCR می تواند دلیل شکست باشد، بررسی باید از مجموعه نمونه تکرار شود.

4. برای نمونه های مثبت و ویروس کشت شده، نتایج کنترل داخلی تاثیری ندارد.

برای نمونه‌هایی که تست منفی شدند، کنترل داخلی باید مثبت باشد، در غیر این صورت نتیجه کلی نامعتبر است و آزمایش باید تکرار شود، از مرحله جمع‌آوری نمونه شروع شود.