Monkeypox Birusa (MPV) Azido Nukleikoak Detektatzeko Kita

Kitak 48 proba edo kalitate kontrola prozesatzeko erreaktiboak ditu, osagai hauek barne:

A erreaktiboa

ErreaktiboaB

Oharra: lote-zenbaki ezberdinen osagaiak ezin dira erabili elkarren artean

【Biltegiratze-baldintzak eta iraupena】

1.A/B erreaktiboa 2-30 °C-tan gorde daiteke, eta iraupena 10 hilabetekoa da.

2.Mesedez, ireki proba-hodiaren estalkia probarako prest zaudenean soilik.

3.Ez erabili saiakuntza-hodiak iraungitze datatik haratago.

4.Ez erabili ihesak detektatzeko hodirik.

【Tresna aplikagarria】

Egokia LC480 PCR analisi sistemarako egokia, Gentier 48E PCR analisi sistema automatikoa, ABI7500 PCR analisi sistemarako.

【Lagin-baldintzak】

1.Lagin mota aplikagarriak: eztarriaren laginak.

2. Laginketa irtenbidea:Egiaztatu ondoren, laginak biltzeko Hangzhou Testsea biologiak ekoitzitako gatz normala edo birusak kontserbatzeko hodi erabiltzea gomendatzen da.

eztarriko zurtoina:garbitu aldebiko faringe-amigdalak eta atzeko faringearen horma bota eta botatzeko laginketa esterila batekin, murgildu 3 ml-ko lagin-soluzioa duen hodian, buztana baztertu eta estutu hodiaren estalkia.

3.Laginak biltegiratzea eta entrega:Probatu beharreko laginak ahalik eta azkarren probatu behar dira.Garraio-tenperatura 2 ~ 8 ℃-tan mantendu behar da. 24 ordutan probatu daitezkeen laginak 2 ℃ ~ 8 ℃-tan gorde daitezke eta laginak ezin badira probatu 24 ordutan, baino gutxiago edo berdinean gorde behar dira. -70 ℃-ra (-70 ℃-ko biltegiratze baldintzarik ez badago, -20 ℃-tan gorde daiteke aldi baterako), saihestu errepikapenak

izoztea eta desizoztea.

4.Proper laginak biltzea, biltegiratzea eta garraioa funtsezkoak dira produktu honen errendimendurako.

【Proba metodoa】

1.Laginak prozesatzea eta laginak gehitzea

1.1 Laginak prozesatzea

Goiko laginketa-disoluzioa laginekin nahastu ondoren, hartu laginaren 30μL DNA askatzeko erreaktibo-hodian eta nahastu uniformeki.

1.2 Kargatzea

Hartu 20μL birkonstituzio erreaktibotik eta gehitu MPV detektatzeko erreaktibora, gehitu goian prozesatutako laginaren 5μL (kontrol positiboa eta kontrol negatiboa laginekin paraleloan prozesatu behar dira), estali hodi-tapa, zentrifugatu 2000 rpm-tan 10. segundoak.

2. PCR anplifikazioa

2.1 Prestatutako PCR plaka/hodiak kargatu fluoreszentzia PCR tresnan, kontrol negatiboa eta kontrol positiboa ezarriko dira proba bakoitzean.

2.2 Kanal fluoreszenteen ezarpena:

1) Aukeratu FAM kanala MPV detektatzeko;

2) Aukeratu HEX/VIC kanala barne-kontroleko geneak detektatzeko;

3.Emaitzen azterketa

Ezarri oinarrizko lerroa kontrol negatiboaren kurba fluoreszentearen puntu gorenaren gainean.

4.Kalitate kontrola

4.1 Kontrol negatiboa: ez da Ct baliorik detektatu FAM、HEX/VIC kanalean, edo Ct＞40；;

4.2 Kontrol positiboa: FAM、HEX/VIC kanalean, Ct≤40；

4.3 Aurreko baldintzak esperimentu berean bete behar dira, bestela probaren emaitzak baliogabeak dira eta esperimentua errepikatu behar da.

【Moztu balioa】

Lagin bat positibotzat hartzen da: Helburu-sekuentzia Ct≤40, Barne-kontroleko genea Ct≤40.

【Emaitzen interpretazioa】

Kalitate-kontrola gainditu ondoren, erabiltzaileek HEX/VIC kanalean lagin bakoitzaren anplifikazio-kurba dagoen egiaztatu beharko lukete, badago eta Ct≤40-rekin, barne-kontroleko genea arrakastaz anplifikatu dela adierazi zuen eta proba zehatz hau baliozkoa dela.Erabiltzaileek jarraipen-analisia egin dezakete:

3. Barne-kontroleko genearen anplifikazioa huts egin duten laginetarako (HEX/VIC

kanala, Ct > 40, edo anplifikazio-kurbarik ez), karga biral baxua edo PCR inhibitzailea egotea porrotaren arrazoia izan daiteke, azterketa errepikatu behar da lagin-bildumatik;

4.Lagin positiboetarako eta birus hazietarako, barne-kontrolaren emaitzek ez dute eragiten;

Proba negatiboa duten laginetarako, barne-kontrola positiboa izan behar da, bestela emaitza orokorra baliogabea izango da eta azterketa errepikatu behar da, laginak biltzeko urratsetik hasita.