SARS-CoV-2 neutraliseerivate antikehade tuvastamise komplekt (ELISA)
【KASUTAMINE】
SARS-CoV-2 neutraliseerivate antikehade tuvastamise komplekt on konkureeriv ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs (ELISA), mis on ette nähtud SARS-CoV-2 neutraliseerivate antikehade kvalitatiivseks ja poolkvantitatiivseks tuvastamiseks inimese seerumis ja plasmas. SARS-CoV-2 neutraliseerivate antikehade tuvastamise komplekti saab kasutada abivahendina isikute tuvastamisel, kellel on SARS-CoV-2 suhtes adaptiivne immuunvastus, mis näitab hiljutist või varasemat nakatumist. SARS-CoV-2 neutraliseerivate antikehade tuvastamise komplekti ei tohi kasutada ägeda SARS-CoV-2 infektsiooni diagnoosimiseks.
【SISSEJUHATUS】
Koronaviirusnakkused kutsuvad tavaliselt esile neutraliseerivate antikehade vastused. Serokonversiooni määr COVID-19 patsientidel on 7. ja 14. päeval pärast sümptomite tekkimist vastavalt 50% ja 100%. Teadmiste kohaselt on vastav viirust neutraliseeriv antikeha veres tunnistatud sihtmärgiks antikehade efektiivsuse määramisel ja neutraliseeriva antikeha kõrgem kontsentratsioon viitab kõrgemale kaitsetõhususele. Plaque Reduction Neutralization Test (PRNT) on tunnistatud kullastandardiks neutraliseerivate antikehade tuvastamisel. Kuid väikese läbilaskevõime ja suurema töövajaduse tõttu ei ole PRNT otstarbekas suuremahuliseks serodiagnostikaks ja vaktsiinide hindamiseks. SARS-CoV-2 neutraliseerivate antikehade tuvastamise komplekt põhineb ELISA (Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) metoodikal, mis suudab tuvastada neutraliseerivat antikeha vereproovis ja saada spetsiaalselt ligipääsu seda tüüpi antikehade kontsentratsioonitasemetele.
【Testimisprotseduur】
1. Eraldi tuubidesse jaotage 120 μL valmistatud hACE2-HRP lahust.
2. Lisage igasse katsutisse 6 μL kalibraatoreid, tundmatuid proove, kvaliteedikontrolli ja segage hästi.
3. Viige 100 μL igast etapis 2 valmistatud segust vastavatesse mikroplaadi süvenditesse vastavalt eelnevalt kavandatud katsekonfiguratsioonile.
3. Katke plaat Plate Sealer'iga ja inkubeerige 37 °C juures 60 minutit.
4.Eemaldage plaadisulgur ja peske plaati umbes 300 μL 1× pesulahusega süvendi kohta neli korda.
5. Koputage plaati paberrätikule, et pärast pesemist eemaldada süvenditest jääkvedelik.
6. Lisage igasse süvendisse 100 μL TMB lahust ja inkubeerige plaati pimedas temperatuuril 20–25 °C 20 minutit.
7. Reaktsiooni peatamiseks lisage igasse süvendisse 50 μL stopplahust.
8. Lugege 10 minuti jooksul mikroplaadilugeja neeldumist lainepikkusel 450 nm (suurema täpsuse saavutamiseks on soovitatav lisavarustusena 630 nm).
