Ahvirõugete viiruse (MPV) nukleiinhappe tuvastamise komplekt

Komplekt sisaldab reaktiive 48 testi töötlemiseks või kvaliteedikontrolliks, sealhulgas järgmisi komponente:

Reaktiiv A

ReaktiivB

Märkus. Erinevate partiinumbritega komponente ei saa kasutada vaheldumisi

【Säilitamistingimused ja säilivusaeg】

1. Reaktiivi A/B võib hoida temperatuuril 2–30°C ja säilivusaeg on 10 kuud.

2. Avage katseklaasi kaas alles siis, kui olete testiks valmis.

3. Ärge kasutage katseklaase pärast aegumiskuupäeva.

4. Ärge kasutage lekketuvastustoru.

【Kohaldatav instrument】

Sobib LC480 PCR analüüsisüsteemile, Gentier 48E automaatsele PCR analüüsisüsteemile, ABI7500 PCR analüüsisüsteemile.

【Näidisnõuded】

1. Rakendatavad näidistüübid: kurgutampooniproovid.

2. Proovivõtulahus:Pärast kontrollimist on soovitatav kasutada proovide kogumiseks tavalist soolalahust või viiruse säilitustoru, mis on toodetud ettevõtte Hangzhou Testsea biology.

kurgu tampoon:pühkige kahepoolsed neelumandlid ja neelu tagumine sein ühekordselt kasutatava steriilse proovivõtutampooniga, sukeldage tampooni 3 ml proovivõtulahust sisaldavasse katsutisse, visake saba ära ja pingutage toru kate.

3. Näidiste ladustamine ja kohaletoimetamine:Testitavaid proove tuleks testida niipea kui võimalik.Transporditemperatuuri tuleks hoida 2–8 ℃. Proove, mida saab testida 24 tunni jooksul, võib hoida temperatuuril 2℃–8 ℃ ja kui proove ei saa 24 tunni jooksul testida, tuleb neid hoida temperatuuril, mis on väiksem või võrdne. kuni -70 ℃ (kui ei ole säilitustingimusi -70 ℃, võib seda ajutiselt säilitada temperatuuril -20 ℃), vältige kordusi

külmutamine ja sulatamine.

4. Proovide nõuetekohane kogumine, ladustamine ja transportimine on selle toote toimimise seisukohalt kriitilise tähtsusega.

【Testimismeetod】

1. Proovi töötlemine ja proovi lisamine

1.1 Proovi töötlemine

Pärast ülaltoodud proovivõtulahuse segamist proovidega võtke 30 μL proovi DNA vabastamisreagendi katsutisse ja segage see ühtlaseks.

1.2 Laadimine

Võtke 20 μL lahustamisreaktiivi ja lisage see MPV tuvastamisreagendile, lisage 5 μL ülaltoodud töödeldud proovi (positiivset kontrolli ja negatiivset kontrolli töödeldakse paralleelselt proovidega), katke katsuti kork, tsentrifuugige seda kiirusel 2000 p/min 10 sekundit.

2. PCR amplifikatsioon

2.1. Laadige ettevalmistatud PCR-plaat/-torud fluorestsents-PCR-instrumendile. Iga testi jaoks määratakse negatiivne kontroll ja positiivne kontroll.

2.2 Luminofoorkanali seadistus:

1) Valige MPV tuvastamiseks FAM-kanal；

2) Valige sisekontrolli geeni tuvastamiseks HEX/VIC kanal；

3. Tulemuste analüüs

Seadke baasjoon negatiivse kontrolli fluorestsentskõvera kõrgeimast punktist kõrgemale.

4.Kvaliteedikontroll

4.1 Negatiivne kontroll: FAM, HEX/VIC kanalis või Ct＞40 ei tuvastata Ct väärtust

4.2 Positiivne juhtimine: FAM, HEX/VIC kanalis, Ct≤40；

4.3 Ülaltoodud nõuded peavad olema täidetud samas katses, vastasel juhul on testi tulemused kehtetud ja katset tuleb korrata.

【Lõika väärtus】

Proov loetakse positiivseks, kui: sihtjärjestus Ct≤40, sisekontrolligeen Ct≤40.

【Tulemuste tõlgendamine】

Kui kvaliteedikontroll on läbitud, peaksid kasutajad kontrollima, kas HEX/VIC kanalis on iga proovi jaoks amplifikatsioonikõver, kui see on olemas, ja kui Ct≤40, näitab see, et sisemise kontrolli geen on edukalt amplifitseeritud ja see konkreetne test on kehtiv.Kasutajad saavad jätkata järelanalüüsi:

3. Proovide puhul, mille sisemise kontrolli geeni amplifitseerimine ebaõnnestus (HEX/VIC

kanal, Ct＞40 või amplifikatsioonikõver puudub), ebaõnnestumise põhjuseks võib olla madal viiruskoormus või PCR-i inhibiitori olemasolu, tuleks uuringut korrata proovide kogumisest;

4. Positiivsete proovide ja kultiveeritud viiruse puhul sisekontrolli tulemused ei mõjuta;

Negatiivsete proovide puhul peab sisekontroll olema positiivne, vastasel juhul on üldtulemus kehtetu ja uuringut tuleb korrata, alustades proovide võtmise etapist.