Kit de detección de anticuerpos neutralizantes del SARS-CoV-2 (ELISA)
【USO PREVISTO】
El kit de detección de anticuerpos neutralizantes del SARS-CoV-2 es un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) competitivo destinado a la detección cualitativa y semicuantitativa de anticuerpos neutralizantes totales contra el SARS-CoV-2 en suero y plasma humanos. El kit de detección de anticuerpos neutralizantes del SARS-CoV-2 se puede utilizar como ayuda para identificar personas con una respuesta inmune adaptativa al SARS-CoV-2, lo que indica una infección reciente o previa. El kit de detección de anticuerpos neutralizantes del SARS-CoV-2 no debe utilizarse para diagnosticar una infección aguda por SARS-CoV-2.
【INTRODUCCIÓN】
Las infecciones por coronavirus suelen inducir respuestas de anticuerpos neutralizantes. Las tasas de seroconversión en pacientes con COVID-19 son del 50% y del 100% el día 7 y 14 después de la aparición de los síntomas, respectivamente. Según los conocimientos actuales, el anticuerpo neutralizante del virus correspondiente en la sangre se reconoce como un objetivo para determinar la eficacia del anticuerpo y una mayor concentración del anticuerpo neutralizante indica una mayor eficacia de protección. La prueba de neutralización por reducción de placa (PRNT) ha sido reconocida como el estándar de oro para detectar anticuerpos neutralizantes. Sin embargo, debido a su bajo rendimiento y mayores requisitos de operación, PRNT no es práctico para el serodiagnóstico y la evaluación de vacunas a gran escala. El kit de detección de anticuerpos neutralizantes del SARS-CoV-2 se basa en la metodología de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) competitivo, que puede detectar el anticuerpo neutralizante en una muestra de sangre, así como acceder especialmente a los niveles de concentración de este tipo de anticuerpo.
【Procedimiento de prueba】
1. En tubos separados, tome alícuotas de 120 μl de la solución hACE2-HRP preparada.
2.Agregue 6 μL de calibradores, muestras desconocidas y controles de calidad en cada tubo y mezcle bien.
3.Transfiera 100 μL de cada mezcla preparada en el paso 2 a los pocillos de la microplaca correspondientes de acuerdo con la configuración de prueba prediseñadas.
3.Cubra la placa con Plate Sealer e incube a 37°C durante 60 minutos.
4.Retire el sellador de placas y lave la placa con aproximadamente 300 μl de solución de lavado 1× por pocillo cuatro veces.
5. Golpee suavemente la placa sobre una toalla de papel para eliminar el líquido residual de los pocillos después de los pasos de lavado.
6.Agregue 100 µL de solución TMB a cada pocillo e incube la placa en la oscuridad a 20 – 25 °C durante 20 minutos.
7.Agregue 50 µL de solución de parada a cada pocillo para detener la reacción.
8.Lea la absorbancia en el lector de microplacas a 450 nm en 10 minutos (se recomienda 630 nm como accesorio para un rendimiento de mayor precisión).
