Κιτ ανίχνευσης αντισωμάτων εξουδετέρωσης SARS-CoV-2 (ELISA)
【ΠΡΟΟΡΙΖΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ】
Το κιτ ανίχνευσης αντισωμάτων εξουδετέρωσης SARS-CoV-2 είναι μια ανταγωνιστική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία συνδεδεμένη με ένζυμα (ELISA) που προορίζεται για ποιοτική και ημιποσοτική ανίχνευση ολικών εξουδετερωτικών αντισωμάτων κατά του SARS-CoV-2 στον ανθρώπινο ορό και στο πλάσμα. Το κιτ ανίχνευσης αντισωμάτων εξουδετέρωσης SARS-CoV-2 μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως βοήθημα στον εντοπισμό ατόμων με προσαρμοστική ανοσολογική απόκριση στον SARS-CoV-2, υποδεικνύοντας πρόσφατη ή προηγούμενη μόλυνση. Το κιτ ανίχνευσης αντισωμάτων εξουδετέρωσης SARS-CoV-2 δεν πρέπει να χρησιμοποιείται για τη διάγνωση οξείας λοίμωξης SARS-CoV-2.
【ΕΙΣΑΓΩΓΗ】
Οι λοιμώξεις από κορωνοϊό συνήθως προκαλούν αποκρίσεις εξουδετερωτικών αντισωμάτων. Τα ποσοστά ορομετατροπής σε ασθενείς με COVID-19 είναι 50% και 100% την 7η και 14η ημέρα μετά την έναρξη των συμπτωμάτων, αντίστοιχα. Για να παρουσιαστεί η γνώση, το αντίστοιχο αντίσωμα εξουδετέρωσης του ιού στο αίμα αναγνωρίζεται ως στόχος για τον προσδιορισμό της αποτελεσματικότητας του αντισώματος και η υψηλότερη συγκέντρωση του εξουδετερωτικού αντισώματος υποδηλώνει υψηλότερη αποτελεσματικότητα προστασίας. Το τεστ εξουδετέρωσης μείωσης της πλάκας (PRNT) έχει αναγνωριστεί ως το χρυσό πρότυπο για την ανίχνευση εξουδετερωτικών αντισωμάτων. Ωστόσο, λόγω της χαμηλής απόδοσης και της υψηλότερης απαίτησης για λειτουργία, το PRNT δεν είναι πρακτικό για μεγάλης κλίμακας οροδιάγνωση και αξιολόγηση εμβολίων. Το κιτ ανίχνευσης αντισωμάτων εξουδετέρωσης SARS-CoV-2 βασίζεται στη μεθοδολογία Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA), η οποία μπορεί να ανιχνεύσει το εξουδετερωτικό αντίσωμα στο δείγμα αίματος καθώς και να έχει ειδική πρόσβαση στα επίπεδα συγκέντρωσης αυτού του τύπου αντισώματος.
【Διαδικασία δοκιμής】
1.Σε χωριστά σωληνάρια, αποσπάστε 120μL από το παρασκευασμένο Διάλυμα hACE2-HRP.
2. Προσθέστε 6 μL βαθμονομητές, άγνωστα δείγματα, ποιοτικούς ελέγχους σε κάθε σωληνάριο και ανακατέψτε καλά.
3.Μεταφέρετε 100μL από κάθε μείγμα που παρασκευάστηκε στο βήμα 2 σε αντίστοιχα φρεάτια μικροπλάκας σύμφωνα με την προσχεδιασμένη διαμόρφωση δοκιμής.
3. Καλύψτε την πλάκα με Plate Sealer και επωάστε στους 37°C για 60 λεπτά.
4. Αφαιρέστε το Plate Sealer και πλύνετε την πλάκα με περίπου 300 μL 1× Wash Solution ανά φρεάτιο για τέσσερις φορές.
5. Χτυπήστε το πιάτο σε χαρτοπετσέτα για να αφαιρέσετε τα υπολείμματα υγρού στα φρεάτια μετά τα βήματα πλύσης.
6. Προσθέστε 100 μL διαλύματος TMB σε κάθε φρεάτιο και επωάστε την πλάκα στο σκοτάδι στους 20 – 25°C για 20 λεπτά.
7. Προσθέστε 50 μL Διαλύματος Διακοπής σε κάθε πηγαδάκι για να σταματήσετε την αντίδραση.
8.Διαβάστε την απορρόφηση στη συσκευή ανάγνωσης μικροπλάκας στα 450 nm μέσα σε 10 λεπτά (συνιστώνται τα 630 nm ως αξεσουάρ για απόδοση υψηλότερης ακρίβειας.
