Κιτ ανίχνευσης νουκλεϊκών οξέων για τον ιό της ευλογιάς των πιθήκων (MPV).

Το κιτ περιέχει αντιδραστήρια για την επεξεργασία 48 δοκιμών ή ποιοτικού ελέγχου, συμπεριλαμβανομένων των ακόλουθων εξαρτημάτων:

Αντιδραστήριο Α

ΑντιδραστήριοB

Σημείωση: Τα στοιχεία διαφορετικών αριθμών παρτίδας δεν μπορούν να χρησιμοποιηθούν εναλλακτικά

【Συνθήκες αποθήκευσης και διάρκεια ζωής】

1. Το αντιδραστήριο A/B μπορεί να αποθηκευτεί στους 2-30°C και η διάρκεια ζωής είναι 10 μήνες.

2. Ανοίξτε το κάλυμμα του δοκιμαστικού σωλήνα μόνο όταν είστε έτοιμοι για τη δοκιμή.

3. Μη χρησιμοποιείτε δοκιμαστικούς σωλήνες πέραν της ημερομηνίας λήξης.

4. Μην χρησιμοποιείτε σωλήνα ανίχνευσης διαρροής.

【Εφαρμοστέο όργανο】

Κατάλληλο για Κατάλληλο για σύστημα ανάλυσης LC480 PCR, σύστημα αυτόματης ανάλυσης PCR Gentier 48E, σύστημα ανάλυσης PCR ABI7500.

【Απαιτήσεις δειγμάτων】

1.Εφαρμοστέοι τύποι δειγμάτων: δείγματα επιχρίσματος λαιμού.

2.Λύση δειγματοληψίας:Μετά την επαλήθευση, συνιστάται η χρήση φυσιολογικού ορού ή σωλήνας διατήρησης ιών που παράγεται από τη βιολογία Hangzhou Testsea για τη συλλογή δειγμάτων.

μπατονέτα λαιμού:σκουπίστε τις αμφίπλευρες αμυγδαλές του φάρυγγα και το οπίσθιο φαρυγγικό τοίχωμα με αποστειρωμένο μάκτρο δειγματοληψίας μιας χρήσης, βυθίστε το στυλεό στο σωληνάριο που περιέχει 3 ml διαλύματος δειγματοληψίας, πετάξτε την ουρά και σφίξτε το κάλυμμα του σωλήνα.

3. Αποθήκευση και παράδοση δειγμάτων:Τα προς δοκιμή δείγματα θα πρέπει να ελέγχονται το συντομότερο δυνατό.Η θερμοκρασία μεταφοράς θα πρέπει να διατηρείται στους 2~8℃.Τα δείγματα που μπορούν να ελεγχθούν εντός 24 ωρών μπορούν να αποθηκευτούν στους 2℃~8℃ και εάν τα δείγματα δεν μπορούν να ελεγχθούν εντός 24 ωρών, θα πρέπει να αποθηκευτούν σε λιγότερο ή ίσο έως -70℃ (αν δεν υπάρχει κατάσταση αποθήκευσης -70℃, μπορεί να αποθηκευτεί στους -20℃ προσωρινά), αποφύγετε την επανάληψη

κατάψυξη και απόψυξη.

4. Η σωστή συλλογή, αποθήκευση και μεταφορά δειγμάτων είναι ζωτικής σημασίας για την απόδοση αυτού του προϊόντος.

【Μέθοδος δοκιμής】

1.Επεξεργασία δειγμάτων και προσθήκη δειγμάτων

1.1 Επεξεργασία δειγμάτων

Μετά την ανάμειξη του παραπάνω διαλύματος δειγματοληψίας με δείγματα, πάρτε 30μL του δείγματος στο σωληνάριο αντιδραστηρίου απελευθέρωσης DNA και αναμείξτε το ομοιόμορφα.

1.2 Φόρτωση

Πάρτε 20 μL του αντιδραστηρίου ανασύστασης και προσθέστε το στο αντιδραστήριο ανίχνευσης MPV, προσθέστε 5 μL του παραπάνω επεξεργασμένου δείγματος (Ο θετικός μάρτυρας και ο αρνητικός μάρτυρας θα υποβληθούν σε επεξεργασία παράλληλα με τα δείγματα), καλύψτε το καπάκι του σωλήνα, φυγοκεντρήστε το στις 2000 rpm για 10 δευτερόλεπτα.

2. Ενίσχυση PCR

2.1 Φορτώστε την προετοιμασμένη πλάκα/σωλήνες PCR στο όργανο PCR φθορισμού. Ο αρνητικός μάρτυρας και ο θετικός μάρτυρας θα ρυθμιστούν για κάθε δοκιμή.

2.2 Ρύθμιση καναλιού φθορισμού:

1) Επιλέξτε κανάλι FAM για ανίχνευση MPV.

2)Επιλέξτε κανάλι HEX/VIC για ανίχνευση γονιδίου εσωτερικού ελέγχου.

3.Ανάλυση αποτελεσμάτων

Ρυθμίστε τη γραμμή βάσης πάνω από το υψηλότερο σημείο της καμπύλης φθορισμού του αρνητικού ελέγχου.

4. Ποιοτικός έλεγχος

4.1 Αρνητικός έλεγχος: Δεν ανιχνεύθηκε τιμή Ct στο κανάλι FAM, HEX/VIC ή Ct＞40；

4.2 Θετικός έλεγχος: Σε κανάλι FAM, HEX/VIC, Ct≤40；

4.3 Οι παραπάνω απαιτήσεις θα πρέπει να πληρούνται στο ίδιο πείραμα, διαφορετικά τα αποτελέσματα της δοκιμής δεν είναι έγκυρα και το πείραμα πρέπει να επαναληφθεί.

【Αποκοπή τιμής】

Ένα δείγμα θεωρείται θετικό όταν: Αλληλουχία στόχος Ct≤40, Το γονίδιο εσωτερικού ελέγχου Ct≤40.

【Ερμηνεία αποτελεσμάτων】

Μόλις περάσει ο ποιοτικός έλεγχος, οι χρήστες θα πρέπει να ελέγξουν εάν υπάρχει καμπύλη ενίσχυσης για κάθε δείγμα στο κανάλι HEX/VIC, εάν υπάρχει και με Ct≤40, έδειξε ότι το γονίδιο εσωτερικού ελέγχου έχει ενισχυθεί επιτυχώς και η συγκεκριμένη δοκιμή είναι έγκυρη.Οι χρήστες μπορούν να προχωρήσουν στην ανάλυση παρακολούθησης:

3. Για δείγματα με την ενίσχυση του γονιδίου εσωτερικού ελέγχου απέτυχε (HEX/VIC

κανάλι, Ct＞40, ή καμία καμπύλη ενίσχυσης), χαμηλό ιικό φορτίο ή η ύπαρξη αναστολέα PCR μπορεί να είναι η αιτία της αποτυχίας, η εξέταση θα πρέπει να επαναληφθεί από τη συλλογή του δείγματος.

4. Για θετικά δείγματα και καλλιεργημένο ιό, τα αποτελέσματα του εσωτερικού ελέγχου δεν επηρεάζουν.

Για δείγματα που εξετάστηκαν αρνητικά, ο εσωτερικός μάρτυρας πρέπει να είναι θετικός, διαφορετικά το συνολικό αποτέλεσμα είναι άκυρο και η εξέταση πρέπει να επαναληφθεί, ξεκινώντας από το βήμα συλλογής δειγμάτων