Kit zum Nachweis neutralisierender Antikörper gegen SARS-CoV-2 (ELISA)
【VERWENDUNGSZWECK】
Das SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit ist ein kompetitiver Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA), der für den qualitativen und semiquantitativen Nachweis der gesamten neutralisierenden Antikörper gegen SARS-CoV-2 in menschlichem Serum und Plasma vorgesehen ist. Das SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit kann als Hilfsmittel bei der Identifizierung von Personen mit einer adaptiven Immunantwort auf SARS-CoV-2 verwendet werden, was auf eine kürzlich erfolgte oder frühere Infektion hinweist. Das SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit sollte nicht zur Diagnose einer akuten SARS-CoV-2-Infektion verwendet werden.
【EINFÜHRUNG】
Coronavirus-Infektionen lösen typischerweise neutralisierende Antikörperreaktionen aus. Die Serokonversionsraten bei COVID-19-Patienten liegen am 7. bzw. 14. Tag nach Symptombeginn bei 50 % bzw. 100 %. Nach heutigem Kenntnisstand ist der entsprechende virusneutralisierende Antikörper im Blut als Ziel für die Bestimmung der Antikörperwirksamkeit anerkannt, und eine höhere Konzentration des neutralisierenden Antikörpers weist auf eine höhere Schutzwirksamkeit hin. Der Plaque Reduction Neutralization Test (PRNT) gilt als Goldstandard für den Nachweis neutralisierender Antikörper. Aufgrund des geringen Durchsatzes und der höheren Betriebsanforderungen ist PRNT jedoch für die Serodiagnose und Impfstoffbewertung im großen Maßstab nicht geeignet. Das Kit zum Nachweis neutralisierender Antikörper gegen SARS-CoV-2 basiert auf der ELISA-Methode (Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), mit der der neutralisierende Antikörper in Blutproben nachgewiesen und speziell auf die Konzentrationswerte dieses Antikörpertyps zugegriffen werden kann.
【Testverfahren】
1. Aliquotieren Sie in separaten Röhrchen 120 μl der vorbereiteten hACE2-HRP-Lösung.
2. 6 μl Kalibratoren, unbekannte Proben und Qualitätskontrollen in jedes Röhrchen geben und gut mischen.
3. Übertragen Sie 100 μl jeder in Schritt 2 hergestellten Mischung in die entsprechenden Mikrotiterplattenvertiefungen entsprechend der vorgefertigten Testkonfiguration.
3. Decken Sie die Platte mit Plate Sealer ab und inkubieren Sie sie 60 Minuten lang bei 37 °C.
4. Entfernen Sie den Plattenversiegeler und waschen Sie die Platte viermal mit ca. 300 μl 1× Waschlösung pro Vertiefung.
5. Klopfen Sie die Platte nach den Waschschritten auf ein Papiertuch, um Restflüssigkeit in den Vertiefungen zu entfernen.
6. Geben Sie 100 μl TMB-Lösung in jede Vertiefung und inkubieren Sie die Platte 20 Minuten lang im Dunkeln bei 20 – 25 °C.
7. Geben Sie 50 μl Stopplösung in jede Vertiefung, um die Reaktion zu stoppen.
8. Lesen Sie die Absorption im Mikroplatten-Lesegerät bei 450 nm innerhalb von 10 Minuten ab (630 nm als Zubehör wird für eine höhere Präzisionsleistung empfohlen).
