Pecyn Canfod Gwrthgyrff niwtraleiddio SARS-COV-2 (ELISA)
【Egwyddorion】
Mae pecyn canfod gwrthgyrff niwtraleiddio SARS-COV-2 yn seiliedig ar fethodoleg ELISA gystadleuol.
Gan ddefnyddio parth rhwymo derbynnydd wedi'i buro (RBD), protein o'r protein pigyn (au) firaol a'r gell letyol
Derbynnydd ACE2, mae'r prawf hwn wedi'i gynllunio i ddynwared y rhyngweithio niwtraleiddio firws.
Mae calibradwyr, rheolyddion ansawdd, a samplau serwm neu plasma yn cael eu cymysgu'n unigol yn dda wrth eu gwanhau
Mae byffer sy'n cynnwys HACE2-HRP yn cyd-fynd ag aliquot mewn tiwbiau bach. Yna mae'r cymysgeddau'n cael eu trosglwyddo i mewn
Y ffynhonnau microplate sy'n cynnwys darn RBD SARS-COV-2 RBD (RBD).
deori. Yn ystod y deori 30 munud, mae'r gwrthgorff penodol RBD yn y calibradwyr, QC a
Bydd samplau yn cystadlu â'r HACE2-HRP i rwymo'r RBD yn benodol yn y ffynhonnau. Wedi
Y deori, mae'r ffynhonnau'n cael eu golchi 4 gwaith i gael gwared ar gyfuniad HACE2-HRP heb ei rwymo. Datrysiad o
Yna caiff TMB ei ychwanegu a'i ddeor am 20 munud ar dymheredd yr ystafell, gan arwain at ddatblygiad a
lliw glas. Mae'r datblygiad lliw yn cael ei stopio trwy ychwanegu 1N HCl, ac mae'r amsugnedd yn
Sbectroffotometreg wedi'i fesur ar 450 nm. Mae dwyster y lliw a ffurfiwyd yn gymesur â'r
faint o ensym sy'n bresennol, ac mae'n gysylltiedig yn wrthdro â faint o safonau sy'n cael eu profi yn yr un modd.
Trwy gymharu â'r gromlin raddnodi a ffurfiwyd gan y calibradwyr a ddarperir, crynodiad
Yna cyfrifir gwrthgyrff niwtraleiddio yn y sampl anhysbys.
【Deunyddiau sy'n ofynnol ond heb eu darparu】
1. Dŵr distyll neu wedi'i ddad -ddyneiddio
2. Pibellau manwl: 10μl, 100μl, 200μl ac 1 ml
3. Awgrymiadau pibed tafladwy
4. Darllenydd Microplate yn gallu darllen amsugnedd ar 450nm.
5. Papur amsugnol
6. Papur Graff
7. Cymysgydd Vortex neu gyfwerth
【Casglu a storio sbesimenau】
1. Gellir defnyddio samplau serwm a plasma a gasglwyd mewn tiwbiau sy'n cynnwys K2-EDTA ar gyfer y pecyn hwn.
2. Dylid capio sbesimenau a gellir eu storio am hyd at 48 awr ar 2 ° C - 8 ° C cyn eu profi.
Dim ond unwaith ar -20 ° C y dylid rhewi sbesimenau a ddelir am amser hirach (hyd at 6 mis) cyn ei assay.
Osgoi cylchoedd rhewi-dadmer dro ar ôl tro.
Phrotocol
【Paratoi ymweithredydd】
1. Rhaid tynnu pob adweithydd o reweiddio a chaniatáu iddo ddychwelyd i dymheredd yr ystafell cyn ei ddefnyddio
(20 ° i 25 ° C). Arbedwch yr holl adweithyddion yn yr oergell yn brydlon ar ôl ei ddefnyddio.
2. Dylai pob sampl a rheolyddion gael eu fortecsio cyn eu defnyddio.
3. Paratoi Datrysiad HACE2-HRP: Gwanhau HACE2-HRP Canolbwyntiwch ar gymhareb gwanhau 1: 51 gyda gwanhau
Byffer. Er enghraifft, gwanhau 100 μl o HACE2-HRP Canolbwyntiwch gyda 5.0ml o byffer gwanhau HRP i
Gwnewch ddatrysiad HACE2-HRP.
Paratoi Datrysiad Golchi 4. 1 ×: Gwanhewch y toddiant golchi 20 × gyda dŵr wedi'i ddad -ddeio neu ddistyllu gyda
Cymhareb Cyfrol o 1:19. Er enghraifft, gwanhau 20 ml o hydoddiant golchi 20 × gyda 380 ml o deionized neu
Dŵr distyll i wneud 400 ml o doddiant golchi 1 ×.
【Gweithdrefn Prawf】
1. Mewn tiwbiau ar wahân, aliquot 120μl o'r toddiant HACE2-HRP a baratowyd.
2. Ychwanegwch 6 μl o calibradwyr, samplau anhysbys, rheolyddion ansawdd ym mhob tiwb a'u cymysgu'n dda.
3. Trosglwyddo 100μl o bob cymysgedd a baratowyd yng ngham 2 i ffynhonnau microplate cyfatebol yn ôl
i gyfluniad prawf wedi'i ragflaenu.
3. Gorchuddiwch y plât gyda sealer plât a'i ddeor ar 37 ° C am 30 munud.
4. Tynnwch y sealer plât a golchwch y plât gyda thua 300 μl o doddiant golchi 1 × fesul ffynnon bedair gwaith.
5. Tapiwch y plât ar dywel papur i gael gwared ar hylif gweddilliol yn y ffynhonnau ar ôl golchi grisiau.
6. Ychwanegwch 100 μl o doddiant TMB i bob ffynnon a deorwch y plât mewn tywyllwch ar 20 - 25 ° C am 20 munud.
7. Ychwanegwch 50 μl o doddiant stopio i bob ffynnon i atal yr adwaith.
8. Darllenwch yr amsugnedd mewn darllenydd microplate ar 450 nm o fewn 10 munud (630nm fel affeithiwr
argymhellir ar gyfer perfformiad manwl uwch).