Sada pro detekci neutralizačních protilátek SARS-CoV-2 (ELISA)
【URČENÉ POUŽITÍ】
SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit je kompetitivní enzymatický imunosorbentní test (ELISA) určený pro kvalitativní a semikvantitativní detekci celkových neutralizačních protilátek proti SARS-CoV-2 v lidském séru a plazmě. Sada pro detekci neutralizačních protilátek SARS-CoV-2 může být použita jako pomůcka při identifikaci jedinců s adaptivní imunitní odpovědí na SARS-CoV-2, která indikuje nedávnou nebo předchozí infekci. Sada pro detekci neutralizačních protilátek SARS-CoV-2 by se neměla používat k diagnostice akutní infekce SARS-CoV-2.
【ZAVEDENÍ】
Koronavirové infekce typicky vyvolávají reakce neutralizující protilátky. Míra sérokonverze u pacientů s COVID-19 je 50 % a 100 % v den 7 a 14 po nástupu příznaků. Podle současných znalostí je odpovídající virus neutralizující protilátka v krvi uznávána jako cíl pro stanovení účinnosti protilátky a vyšší koncentrace neutralizační protilátky ukazuje na vyšší účinnost ochrany. Plaque Reduction Neutralization Test (PRNT) je uznáván jako zlatý standard pro detekci neutralizačních protilátek. Vzhledem ke své nízké propustnosti a vyšším nárokům na provoz však PRNT není praktický pro sérodiagnostiku a hodnocení vakcín ve velkém měřítku. Sada pro detekci neutralizačních protilátek SARS-CoV-2 je založena na metodologii Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA), která dokáže detekovat neutralizační protilátku ve vzorku krve, stejně jako speciální přístup k hladinám koncentrace tohoto typu protilátek.
【Testovací postup】
1.V oddělených zkumavkách alikvotně nalijte 120 μl připraveného roztoku hACE2-HRP.
2. Do každé zkumavky přidejte 6 μl kalibrátorů, neznámých vzorků, kontrol kvality a dobře promíchejte.
3.Přeneste 100 μl každé směsi připravené v kroku 2 do odpovídajících jamek mikrodestičky podle předem navržené konfigurace testu.
3. Destičku zakryjte těsnicí hmotou a inkubujte při 37 °C po dobu 60 minut.
4. Odstraňte těsnění destiček a čtyřikrát destičku promyjte přibližně 300 μl 1× promývacího roztoku na jamku.
5. Poklepejte destičkou na papírový ručník, abyste odstranili zbytkovou tekutinu v jamkách po krocích promytí.
6. Přidejte 100 μl roztoku TMB do každé jamky a inkubujte destičku ve tmě při 20 – 25 °C po dobu 20 minut.
7. Do každé jamky přidejte 50 μl zastavovacího roztoku, abyste zastavili reakci.
8. Odečtěte absorbanci na čtečce mikrodestiček při 450 nm do 10 minut (630 nm jako příslušenství se doporučuje pro vyšší přesnost výkonu).
