Souprava pro detekci nukleových kyselin viru Monkeypox (MPV).

Souprava obsahuje činidla pro zpracování 48 testů nebo kontrolu kvality, včetně následujících komponent:

Činidlo A

ČinidloB

Poznámka: Komponenty různých čísel šarží nelze zaměnit

【Podmínky skladování a trvanlivost】

1.Reagent A/B lze skladovat při 2-30°C a skladovatelnost je 10 měsíců.

2.Otevírejte kryt zkumavky pouze tehdy, když jste připraveni na test.

3. Nepoužívejte zkumavky po uplynutí doby použitelnosti.

4.Nepoužívejte detekční trubici netěsnosti.

【Použitelný nástroj】

Vhodné pro Vhodné pro LC480 PCR analytický systém, Gentier 48E automatický PCR analytický systém, ABI7500 PCR analytický systém.

【Vzorové požadavky】

1.Použitelné typy vzorků: vzorky výtěrů z krku.

2. Vzorkovací roztok:Po ověření se doporučuje pro odběr vzorků použít normální fyziologický roztok nebo zkumavku pro uchování virů od společnosti Hangzhou Testsea biology.

výtěr z krku:otřete oboustranné hltanové mandle a zadní stěnu hltanu jednorázovým sterilním vzorkovacím tamponem, ponořte tampon do zkumavky obsahující 3 ml vzorkovacího roztoku, zlikvidujte ocas a utáhněte kryt zkumavky.

3. Skladování a dodání vzorku:Vzorky, které mají být testovány, by měly být testovány co nejdříve.Přepravní teplota by měla být udržována na 2~8℃. Vzorky, které lze testovat do 24 hodin, lze skladovat při 2℃~8℃ a pokud vzorky nelze testovat do 24 hodin, měly by být skladovány při nižší nebo stejné teplotě. do -70 ℃ (pokud není skladovací podmínka -70 ℃, může být dočasně skladována při -20 ℃), vyhněte se opakování

zmrazení a rozmrazení.

4. Správný odběr vzorků, skladování a přeprava jsou rozhodující pro výkon tohoto produktu.

【Testovací metoda】

1. Zpracování vzorku a přidání vzorku

1.1 Zpracování vzorků

Po smíchání výše uvedeného vzorkovacího roztoku se vzorky odeberte 30 μl vzorku do zkumavky s DNA uvolňovacím činidlem a rovnoměrně jej promíchejte.

1.2 Načítání

Odeberte 20 μl rekonstitučního činidla a přidejte jej do detekčního činidla MPV, přidejte 5 μl výše zpracovaného vzorku (pozitivní kontrola a negativní kontrola musí být zpracovány paralelně se vzorky), zakryjte uzávěr zkumavky a centrifugujte při 2000 otáčkách za minutu po dobu 10 sekundy.

2. PCR amplifikace

2.1 Vložte připravenou PCR destičku/zkumavky do fluorescenčního PCR přístroje, pro každý test se nastaví negativní kontrola a pozitivní kontrola.

2.2 Nastavení fluorescenčního kanálu：

1) Vyberte kanál FAM pro detekci MPV；

2) Vyberte HEX/VIC kanál pro vnitřní kontrolní genovou detekci；

3. Analýza výsledků

Nastavte základní linii nad nejvyšší bod fluorescenční křivky negativní kontroly.

4. Kontrola kvality

4.1 Negativní kontrola：Žádná hodnota Ct detekována v kanálu FAM, HEX/VIC nebo Ct＞40；

4.2 Pozitivní kontrola: V kanálu FAM、HEX/VIC, Ct≤40；

4.3 Výše ​​uvedené požadavky by měly být splněny ve stejném experimentu, jinak jsou výsledky testu neplatné a experiment je třeba opakovat.

【Mezní hodnota】

Vzorek je považován za pozitivní, když: Cílová sekvence Ct≤40, Vnitřní kontrolní gen Ct≤40.

【Interpretace výsledků】

Jakmile projde kontrolou kvality, uživatelé by měli zkontrolovat, zda existuje amplifikační křivka pro každý vzorek v HEX/VIC kanálu, pokud existuje a má Ct≤40, znamená to, že gen vnitřní kontroly je úspěšně amplifikován a tento konkrétní test je platný.Uživatelé mohou přistoupit k následné analýze:

3. U vzorků, u kterých selhala amplifikace interního kontrolního genu (HEX/VIC

kanál, Ct＞40 nebo žádná amplifikační křivka), důvodem selhání může být nízká virová zátěž nebo existence inhibitoru PCR, vyšetření by se mělo opakovat z odběru vzorku;

4.U pozitivních vzorků a kultivovaného viru neovlivňují výsledky vnitřní kontroly;

U negativních vzorků musí být vnitřní kontrola pozitivní, jinak je celkový výsledek neplatný a vyšetření je třeba opakovat, počínaje krokem odběru vzorku