SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit (ELISA)
【PRINSIPYO】
Ang SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit gibase sa kompetisyon nga pamaagi sa ELISA.
Gigamit ang purified receptor binding domain (RBD), protina gikan sa viral spike (S) nga protina ug ang host cell
receptor ACE2, kini nga pagsulay gidesinyo sa pagsundog sa virus-host neutralizing interaksyon.
Ang mga calibrator, Quality Control, ug mga sample sa serum o plasma tinagsa nga gisagol nga maayo sa pagtunaw
buffer nga adunay sulod nga hACE2-HRP conjugate nga gi-aliquoted sa gagmay nga mga tubo.Unya ang mga mixtures ibalhin sa
ang microplate wells nga adunay immobilized recombinant SARS-CoV-2 RBD fragment (RBD) para
paglumlum.Atol sa 30-minutos nga paglumlum, ang RBD piho nga antibody sa mga calibrator, QC ug
Ang mga sample makigkompetensya sa hACE2-HRP alang sa piho nga pagbugkos sa RBD nga wala mapalihok sa mga atabay.Pagkahuman
sa paglumlum, ang mga atabay gihugasan sa 4 ka beses aron makuha ang unbound hACE2-HRP conjugate.Usa ka solusyon sa
Ang TMB dayon idugang ug i-incubate sulod sa 20 minutos sa temperatura sa lawak, nga moresulta sa pagpalambo sa a
asul nga kolor.Ang pag-uswag sa kolor gipahunong sa pagdugang sa 1N HCl, ug ang pagsuyop mao
gisukod spectrophotometrically sa 450 nm.Ang intensity sa kolor nga naporma proporsyonal sa
gidaghanon sa enzyme nga anaa, ug inversely nga may kalabutan sa gidaghanon sa mga sumbanan nga gisusi sa samang paagi.
Pinaagi sa pagtandi sa calibration curve nga naporma sa gihatag nga mga calibrator, ang konsentrasyon sa
Ang pag-neutralize sa mga antibodies sa wala mailhi nga sample dayon kalkulado.
【KINAHANGLAN ANG MGA MATERYAL PERO DILI IHATAG】
1. Distilled o deionized nga tubig
2. Precision pipettes: 10μL, 100μL,200μL ug 1 mL
3. Disposable pipette tips
4. Microplate reader nga makahimo sa pagbasa sa absorbance sa 450nm.
5. Absorbent nga papel
6. Graph nga papel
7. Vortex mixer o katumbas
【KOLEKSIYON UG SPECIMEN】
1. Ang mga sample sa serum ug Plasma nga nakolekta sa mga tubo nga adunay K2-EDTA mahimong magamit alang niini nga kit.
2. Ang mga specimen kinahanglan nga takpan ug mahimong tipigan hangtod sa 48 ka oras sa 2 °C - 8 °C sa dili pa ang pagsulay.
Ang mga specimen nga gihuptan sa mas taas nga panahon (hangtod sa 6 ka bulan) kinahanglang i-freeze kausa lang sa -20 °C sa dili pa ang assay.
Likayi ang balik-balik nga mga siklo sa freeze-thaw.
PROTOCOL
【Pagpangandam sa Reagent】
1. Ang tanan nga mga reagents kinahanglan kuhaon gikan sa refrigerasyon ug tugutan nga mobalik sa temperatura sa kwarto sa dili pa gamiton
(20° hangtod 25°C).I-save dayon ang tanan nga mga reagents sa refrigerator pagkahuman magamit.
2. Ang tanan nga mga sample ug mga kontrol kinahanglan nga vortexed sa dili pa gamiton.
3. hACE2-HRP Pagpangandam sa Solusyon: Dilute ang hACE2-HRP concentrate sa 1: 51 dilution ratio nga adunay Dilution
Buffer.Pananglitan, dilute ang 100 μL nga hACE2-HRP concentrate nga adunay 5.0mL nga HRP Dilution Buffer sa
paghimo og hACE2-HRP nga solusyon.
4. Pagpangandam sa 1× Paghugas sa Solusyon: Ibubo ang 20× Solusyon sa Paghugas sa deionized o distilled nga tubig nga adunay
volume ratio sa 1:19.Pananglitan, dilute ang 20 mL sa 20 × Wash Solution nga adunay 380 mL nga deionized o
distilled nga tubig aron mahimo ang 400 mL sa 1 × Wash Solution.
【Pamaagi sa Pagsulay】
1. Sa lain nga mga tubo, aliquot 120μL sa giandam nga hACE2-HRP Solution.
2. Idugang ang 6 μL nga mga calibrator, wala mailhi nga mga sample, mga kontrol sa kalidad sa matag tubo ug maayo ang pagsagol.
3. Ibalhin ang 100μL sa matag sagol nga giandam sa lakang 2 ngadto sa katugbang nga mga atabay sa microplate sumala sa
sa predesigned test configuration.
3. Tabuni ang plato gamit ang Plate Sealer ug i-incubate sa 37°C sulod sa 30 minutos.
4. Kuhaa ang Plate Sealer ug hugasan ang plato nga adunay gibana-bana nga 300 μL nga 1 × Wash Solution kada atabay sulod sa upat ka beses.
5. I-tap ang plato sa papel nga tualya aron makuha ang nahabilin nga likido sa mga atabay pagkahuman sa mga lakang sa paghugas.
6. Idugang ang 100 μL nga TMB Solution sa matag atabay ug ilumlom ang plato sa ngitngit sa 20 - 25°C sulod sa 20 minutos.
7. Idugang ang 50 μL nga Stop Solution sa matag atabay aron mahunong ang reaksyon.
8. Basaha ang absorbance sa microplate reader sa 450 nm sulod sa 10 minutos (630nm kay ang accessory kay
girekomenda alang sa mas taas nga katukma nga pasundayag).
